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生物惰性液相輕松應對多肽藥物中聚集體的分析

閱讀:377        發布時間:2024-11-18

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在生物醫藥領域,多肽藥物因其高特異性和低毒副作用而展現出巨大的治療潛力。然而,多肽藥物的穩定性和生物活性常常受到其聚集體形成的影響。多肽藥物中的聚集體既有共價結合聚集體,也有非共價結合聚集體,后者因為非特異性互相作用力弱,易受聚集體與尺寸排阻色譜柱間的相互作用力而發生狀態變化,為分析工作造成困難。

 

在此背景下,分析這兩種聚集體對多肽藥物穩定性的研究顯得尤為重要。為此島津基于生物惰性液相開發了一種可以同時檢測多肽藥物中共價結合二聚體和非共價結合二聚體的方法,為相關研究工作者提供參考。

 

樣品準備:共價結合二聚體、非共價結合二聚體、多肽藥物非破壞樣品和通過強制降解實驗得到的多肽藥物破壞樣品,使用洗脫液適當稀釋后制備成待測溶液。

 

分析條件:

儀器:島津生物惰性超高效液相色譜系統Nexera XS inert

色譜柱:SHIMSEN Ankylo SEC-120(300×7.8mm I.D.,3.0μm)

洗脫液:100mM硫酸銨水溶液(含20%乙腈+0.1%TFA)

檢測波長:220nm

其他條件略

 

n                      分離度評價

基于上述分析條件,將共價結合二聚體和非共價結合二聚體加入多肽藥物非破壞樣品中,以評價分離度。分析結果顯示,三個目標峰的分離度大于1.5,說明分離度良好。

圖片 

多肽藥物、共價結合二聚體和非共價結合二聚體色譜圖

分離度結果

圖片 

 

n                      重復性考察

將分離度評價使用的樣品重復進樣6次,以考察重復性。6次重復進樣結果顯示,三個目標峰保留時間和峰面積的RSD分別在0.024%~0.025%、0.048~0.130%,說明重復性良好。結果如下:

圖片 

多肽藥物、共價結合二聚體和非共價結合二聚體重復進樣色譜圖(n=6)

重復性結果(n=6)

圖片 

 

n                      破壞樣品分析

將多肽藥物破壞樣品按照開頭分析條件進樣分析,得到結果如下:其中在多肽藥物破壞樣品中,檢測到非共價結合二聚體(雜質),峰面積百分比為6.934%,未檢測到共價結合二聚體。

圖片 

多肽藥物破壞樣品色譜圖

破壞樣品分析結果

圖片 

 

n                      總結

本研究使用島津生物惰性超高效液相色譜系統建立了一種用于檢測多肽藥物中的非共價結合二聚體及共價結合二聚體雜質的新方法。

生物惰性超高效液相Nexera XS inert可耐受高鹽洗脫液,無金屬的設計避免了金屬敏感型物質的吸附;SHIMSEN Ankylo SEC 120色譜柱及其洗脫液的配方,最大限度*地降低了聚集體雜質與色譜柱之間的非特異性相互作用,從而實現良好的分離效果。該方法展現出良好的分離度和重復性,適合用于多肽藥物中共價結合二聚體和非共價結合二聚體雜質的含量測定與評估。

圖片 

ü                      更大限度降低因金屬吸附而造成的損失

ü                      輕松應對高鹽濃度和極端pH流動相的挑戰

ü                      獲得卓越的靈敏度、重現性和分離度

 

*注:文中涉及最大等程度類描述,僅限于實驗組別對比結果

 

 

本文內容非商業廣告,僅供專業人士參考。

 

 

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