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上海申知心生物科技有限公司
主營產品： 高血脂癥動物模型,心血管疾病動物模型,缺血性心臟病動物模型 |
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細胞劃痕
一、 細胞劃痕實驗原理
腫瘤細胞在體外仍具有遷移的能力。法是測定了腫瘤細胞的運動特性的方法之一。其借鑒體外細胞致傷愈合實驗模型，在體外培養的單層細胞上，劃痕致傷，然后比較不同實驗組中腫瘤細胞遷移的能力。
二、 實驗目的
用質粒Oct-4-EGFP轉染后的A549細胞與正常細胞組、陰性對照組進行比較分析，考察質粒Oct-4-EGFP對A549細胞的遷移能力產生的影響。
三、 實驗步驟
實驗共分以下4個主要步驟：
1. 質粒轉染細胞：
準備A549細胞，轉染前一天按照70-80%密度鋪在6cm培養皿中。16h后，按照轉染試劑說明書轉染細胞（8μg質粒，20μL lipofectamine 2000轉染試劑） 。轉染24h后，重新鋪盤，密度為30-40%。
2. 劃線；
待細胞貼壁后，用200μL tip輕輕劃線，垂直90度，用力均勻，劃線處無細胞。
3. 細胞培養及拍照；
每隔3天換一次新鮮培養基。連續幾天倒置顯微鏡下100X下拍照，記錄細胞的遷移情況，直到細胞填滿劃痕處。
4. 統計分析。
劃線兩側間距為average gaps（AGs），使用Image-Pro Plus軟件分析各組細胞的AGs。
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