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商品屬性：

背景：

5(6)-CFDA, SE 是一種可對活細胞進行熒光標記的細胞示蹤染料，不僅可用于細胞增殖的體外實驗，還可用于追蹤細胞在體內的分裂增殖過程。5(6)-CFDA, SE 是二乙酸熒光素（Fluorescein diacetate，FDA）的衍生物，具有細胞膜滲透性，本身不具有熒光發光性。當通過被動運輸穿透細胞膜進入活細胞后，被胞漿內的酯酶催化生成羧基熒光素琥珀酰亞胺（carboxyfluoresceinsuccinimidyl ester，CFSE），可發強烈的綠色熒光，不能穿透細胞膜，能完好的保留在胞內。CFSE 還可自發并不可逆地與細胞內的氨基結合從而偶聯到細胞蛋白質上，同時過量且未被偶聯的 5(6)-CFDA, SE 通過被動擴散回到細胞外培養基內，被后續清洗步驟所清除。經 5(6)-CFDA, SE 標記的非分裂細胞的熒光非常穩定，穩定標記的時間可達數月，因此非常適用于細胞群落分析。5(6)-CFDA, SE 標記細胞的熒光非常均一，優于以前使用的其他細胞示蹤熒光探針如 PKH26，并且分裂后的子代細胞的熒光分配也很均一。在細胞分裂增殖過程中，CFSE 標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中，熒光強度變為親代細胞的一半，通過流式細胞儀（FL1 通道）根據熒光強度的不同，可檢測出未分裂細胞，分裂一次（1/2 的熒光強度），二次（1/4 的熒光強度），三次（1/8 的熒光強度），以及更多分裂次數的細胞。5(6)-CFDA, SE 可檢測分裂次數多達八次甚至更多。

標記：

1.將細胞培養基與EdU溶液按照500：1的比例混合，制成2×EdU標記培養基。

2.提前將2×EdU標記培養基預熱，然后將150微升2×EdU標記培養基與等體積細胞培養基混合，獲得1×EdU溶液。

【注】：①不建議替換全部培養基，這樣可能會影響細胞增殖的速度。②配置好的培養基建議現用現配，用量以沒過細胞為宜。

3.孵育細胞2 h，棄培養基。

【注】：①培養時間取決于細胞的增殖速度和生長狀態。②大多數腫瘤細胞以及粘附細胞系均可采用2 h的孵育時間。

4.以1xPBS清洗細胞兩次，每次5 min, 以除去未摻入DNA的EdU殘留。

【注】：對于貼壁不牢的細胞可降低清洗強度。

實驗步驟：

1. 將細胞以 104-105 個細胞/孔的密度接種在 96 孔板 中，加入 100μL 培養基，含或不含待測化合物。在 CO2 培養箱中在 37℃ 下培養細胞 24 小時。

2. 向板中加入 10μL 不同濃度的待測物質。

3. 在培養箱中將培養板培養適當時間（如 6、12、24 或 48 小時）。

4. 向板的每個孔中加入 10μL CCK-8 溶液。小心不要將氣泡引入孔中。

5. 將平板在培養箱中孵育 1-4 小時。

6. 在讀板之前，在定軌振蕩器上輕輕混勻。

7. 使用酶標儀測量 450nm 處的吸光度。

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