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豬ELISA試劑盒的操作步驟

閱讀:1373      發(fā)布時(shí)間:2016-8-22
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豬ELISA試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
    豬ELISA試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中豬生長(zhǎng)激素(GH)水平。用純化的豬生長(zhǎng)激素(GH)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入生長(zhǎng)激素(GH),再與HRP標(biāo)記的生長(zhǎng)激素(GH)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的生長(zhǎng)激素(GH)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中豬生長(zhǎng)激素(GH)濃度。

 

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