傳染性造血器官壞死病病毒RT-PCR試劑盒

Infectious Hematopoietic Necrosis Virus(IHNV)

產品及特點

傳染性造血器官壞死病病毒(Infectious Hematopoietic Necrosis Virus, IHNV)是一種 RNA 病毒，多傳染魚類，引起魚傳染性造血器官壞死病，是一種毒 力很強的彈狀病毒所引起的急性、全身性的嚴重傳染病，常發生于鱒魚和太平洋 大馬哈魚的魚苗和種魚。魚傳染性造血器官壞死病爆發時，首先出現稚魚和幼魚 的死亡率突然升高。受侵害的魚通常出現昏睡癥狀，不愿活動和避開水流；但也 有的魚表現狂暴竄、打轉等反常現象。患病魚眼球突出且變黑，腹部膨脹，肛 門處拖著不透明或棕褐色的假管型粘液糞便是較為典型的特征，但并非該病所獨 有。魚鰓蒼白，鰭基部出血，該病的發生會給養殖業造成較大的經濟損失，因此 傳染性造血器官壞死病病毒的快速準確鑒定對該病的預防和檢疫有著重要作用。 為此本公司開發了本產品，可用于在科研領域快速定量檢測傳染性造血器官壞死 病病毒。它具有下列特點： 

1. 一站式，用于不需要單獨準備每種成分，包括引物和對照。

2. 根據傳染性造血器官壞死病病毒的保守基因序列設計的引物，具有良好的特異性。

3. 靈敏度可以達到 1000 拷貝/反應。

4. 使用一管式 RT-PCR 技術，RT 和 PCR 兩步在一個試管內完成，不需要中間 轉移樣品，降低了操作誤差和可能的污染。

5. 本產品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。

6. 本產品只能用于科研，不能用于臨床。

傳染性造血器官壞死病病毒RT-PCR試劑盒規格及成分

運輸及保存 低溫運輸，-20℃保存，保存期限為 12 個月。收到貨后陽性對照需要跟其他成分 分開放置，因為其容易污染其他成分，造成假陽性。 

自備試劑 樣品 RNA

使用方法 一、樣品 RNA 的制備

1. 如果有 N 個樣品，必須設置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性 對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）。可以用 10μL 流行性出血熱病毒 PCR 陽性對照的 100 倍稀釋作為制備的陽性對照；用水作為制備的陰性對照。 制備所得成為樣品 RNA。

2. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 RNA，本試劑盒跟市場上大多數病毒 RNA 提 取試劑盒兼容。

二、設置 RT-PCR 反應（20μL 體系）

3. 如果有 N+2 個樣品，則標記 N+4 個 PCR 管（額外增加的兩個管一個是 RT-PCR 陽性對照，另一個是 RT-PCR 陰性對照）并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分：

4. 上機進行 RT-PCR，RT-PCR 反應參數為:

5. 瓊脂糖電泳檢測擴增效果。如果陰性對照有擴增產物或陽性對照無擴增產物， 則說明實驗失敗，需要分析實驗失敗的原因。只有在陰性對照沒有擴增產物、 陽性對照有 122bp 預期的擴增產物的情況下，才有必要分析樣品的實驗結果， 如果有擴增產物則為陽性，如果無則為陰性。