VitK3聯合吡柔比星抑制人膀胱癌BIU-87細胞株的實驗分析與PTEN基因蛋白表達的相關性研究

王維

南華大學

摘要：背景:膀胱癌(Bladder cancer)是泌尿系統zui常見的惡性腫瘤,也是全身常見腫瘤之一,其發病率在我國呈逐年升高趨勢。表淺性膀胱癌為膀胱癌的早期類型,常規行經尿道膀胱腫瘤切除術(TURBT術)后得到一定治療,但單一手術復發率高,術后結合吡柔比星等藥物進行規律膀胱灌注可以降低復發概率,表明吡柔比星聯合治療在治療膀胱癌患者中具有協同作用。Vit3為人體肝臟合成原酶必需物質,參與相關凝血因子合成,具有利尿增加解毒功能,參與細胞膜性物質修復功能,同時近來國內外不少學者報道,維生素K3對某些腫瘤細胞系的增殖具有抑制作用,能夠作用于細胞使其凋亡。近年來新發現的*個具有磷酸酶活性的抑癌基因PTEN基因,它不僅表現出抑癌基因的特性,而且還具有磷酸酶活性,能夠調節細胞的增殖和死亡,且在細胞的轉移和粘連等方面有重要作用。林延峰[44]等在對膀胱癌組織切片進行檢測后發現,70例癌切片的PTEN表達陽性率是39%,與之相對應的癌旁組織中,PTEN的陽性表達率為100%。張建華等[45]同樣也是用免疫組化的方法來檢測PTEN蛋白的表達,結果顯示癌組織中的陽性率有53.2%,其良性病變中表達陽性率。諸多學者的研究都顯示了抑癌基因PTEN與膀胱癌的發生發展有著緊密,研究PTEN對于深入了解其作用機制和為基因診療奠定理論基礎。雖然膀胱癌的治療取得了一定進展,但術后患者出現的高復發率成為膀胱癌臨床治療方面面臨的重大難題之一,因此探VitK3聯合吡柔比星增強其抑癌率以及探索PTEN基因的表達在吡柔比星及其聯合治療中產生的作用成為了如今研究的一個重要方面。目的:研究VitK3聯合吡柔比星對于上皮癌細胞BIU-87的影響,并分析與PTEN基因表達相關性,為臨床上膀胱聯合灌注及膀胱相關基因表達調控提供了依據。方法:培養人膀胱癌細胞BIU-87;使用MTT(噻唑藍)法分別篩選出吡柔比星和Vitamin K3作用于BIU-87細胞3天后的zui宜用藥濃度;設立空白對照組,吡柔比星作用組,Vitamin K3作用組、聯合用藥組,MTT法檢測各組細胞存活率;采用流式細胞儀觀察人膀胱癌BIU-87細胞培養株的凋亡情況,通過流式軟件分析細胞周期變化;通過Q-PCR實驗分析各個實驗組中人膀胱癌BIU-87細胞PTEN基因表達;通過Western blot實驗檢測各個實驗組BIU-87細胞中PTEN蛋白的表達;結果:吡柔比星藥物濃度在1mg/L到100mg/L濃度范圍中可以有效抑制BIU-87細胞的增殖(P<0.05);Vitamin K3藥物濃度在5 umol/L到20 umol/L的濃度范圍里可以有效抑制BIU-87細胞的增殖(P<0.05);Vitamin K3聯合吡柔比星用藥抑制對于BIU-87細胞的增殖效果更好(P<0.05);采用吡柔比星1mg/L濃度干預BIU-87細胞可以促進其發生凋亡(P<0.05),使得其細胞周期阻滯于G2/M期(P<0.05),采用Vitamin K3 5 umol/L濃度干預BIU-87細胞可以促進其發生凋亡(P<0.05),但其細胞周期與陰性對照組相比較無顯著差異(P>0.05),Vitamin K3聯合吡柔比星干預BIU-87細胞可以使其發生更多凋亡(P<0.05),使得BIU-87細胞周期阻滯于G2/M期(P<0.05);采用吡柔比星1mg/L濃度干預BIU-87細胞可以提高PTEN的m RNA和蛋白的表達水平(P<0.05),采用Vitamin K35 umol/L濃度干預BIU-87細胞可以提高PTEN的m RNA和蛋白的表達水平(P<0.05),Vitamin K3聯合吡柔比星干預BIU-87細胞可以更多提高PTEN的m RNA和蛋白的表達水平(P<0.05);結論:一定濃度的Vitamin K3聯合吡柔比星作用可以顯著抑制人膀胱癌細胞BIU-87的增殖,提高PTEN的表達水平,促使BIU-87細胞發生凋亡并將其細胞周期阻滯于G2/M期。 還原

關鍵詞：PTEN; 膀胱癌; VitK3; 吡柔比星;

導師：吳萬瑞; 李遠偉;

分類號：R737.14