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細胞傳代培養實驗

閱讀:1377      發布時間:2021-5-21
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       體外培養的原代細胞或細胞株要在體外持續地培養就必須傳代,以便獲得穩定的細胞株或得到大量的同種細胞,并維持細胞種的延續。二氧化碳培養箱是通過在培養箱箱體內模擬形成一個類似細胞/組織在生物體內的生長環境,培養箱要求穩定的溫度(37°C)、穩定的CO2水平(5%)、恒定的酸堿度(pH值:7.2-7.4)、較高的相對飽和濕度(95%),來對細胞/組織進行體外培養的一種裝置,是細胞、組織、細菌培養的一種先進儀器,是開展免疫學、腫瘤學、遺傳學及生物工程所必須的關鍵設備。

 

      培養的細胞形成單層匯合以后,由于密度過大生存空間不足而引起營養枯竭,將培養的細胞分散,從容器中取出,以1:2或1:3以上的比率轉移到另外的容器中進行培養,即為傳代培養;細胞“一代”指從細胞接種到分離再培養的一段期間,與細胞世代或倍增不同。

 

      在一代中,細胞培增3~6次。細胞傳代后,一般經過三個階段:游離期、指數增生期和停止期。常用細胞分裂指數表示細胞增殖的旺盛程度,即細胞群的分裂相數/100個細胞。一般細胞分裂指數介于0.2%~0.5%,腫瘤細胞可達3~5%;細胞接種2~3天分裂增殖旺盛,是活力Zui好時期,稱指數增生期(對數生長期),適宜進行各種試驗。

 

      實驗步驟:

     1.將長成的培養細胞從二氧化碳培養箱中取出,在超凈工作臺中倒掉瓶內的培養液,加入少許消化液。(以液面蓋住細胞為宜),靜置5~10分鐘。

     2.在倒置鏡下觀察被消化的細胞,如果細胞變圓,相互之間不再連接成片,這時應立即在超凈臺中將消化液倒掉,加入3~5ml新鮮培養液,吹打,制成細胞懸液。

     3.將細胞懸液吸出2ml左右,加到另一個培養瓶中并向每個瓶中分別加3ml左右培養液,蓋好瓶塞,送回二氧化碳培養箱中,繼續進行培養。一般情況,傳代后的細胞在2小時左右就能附著在培養瓶壁上,2~4天就可在瓶內形成單層,需要再次進行傳代。

 

      如需了解更多二氧化碳培養箱相關的知識,歡迎聯系上海喆圖科學儀器有限公司。

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