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這些細胞培養好習慣和減少污染小細節,你做到了嗎?

閱讀:1201      發布時間:2021-5-28
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保證細胞間的環境無菌與穩定

01

首先保證工作環境干凈整潔,細胞間每周定期進行紫外殺菌,每次30分鐘。細胞間內保持穩定的溫度、濕度及換氣。

02

細胞實驗中涉及的儀器,如:離心機、細胞計數儀、倒置顯微鏡、冰箱等盡量放到細胞間使用,這樣可以保證和環境一起殺菌,保證儀器干凈整潔,不做其他實驗使用。

03

將要使用的耗材提前放到細胞間內,減少無關物品進入細胞間。在實驗過程中減少細胞間門的開關次數,保證環境無菌。

 

細胞培養前人和物的無菌準備

01

準備好純水要高壓滅菌后放到生物安全柜中,用來配制藥品試劑等。

02

抗生素提前配好,用過濾器過濾后分裝,放到-20℃冰箱中保存備用。也可以直接用帶有抗生素的培養基。

03

需要用的血清、胰酶要提前放到4℃冰箱中解凍。血清一般會放到-80℃保存,要逐步解凍,直接放到37℃解凍會出現絮狀物會影響后期使用。

04

操作前要把培養基、胰酶放到37℃細胞培養箱中復溫,減少低溫對細胞的刺激。

05

將本次實驗需要使用的物品移液器、槍頭、移液管等提前放到生物安全柜中,打開紫外燈滅菌20-30分鐘。

06

進入細胞間前要按順序進行自身防護,在緩沖間換好、戴好:拖鞋、帽子、口鼻防護罩、白大衣、手套。拖鞋和白大衣要是細胞間專用。

 

細胞培養無菌操作的小細節

01

在操作前,先用酒精給手套消毒;打開生物安全柜,將工作臺用酒精棉球擦拭一遍,等酒精揮發后,進行細胞實驗操作。

02

拿入到安全柜里面的物品都要用酒精噴灑消毒。

03

培養基、血清、胰酶等大包裝的試劑一定要進行分裝到50mL、15mL離心管中使用,避免污染。如果不小心污染也不會浪費大部分試劑。

04

觀察培養箱中的細胞,用顯微鏡觀察細胞生長密度、生長狀態,是否染菌。培養基的消耗情況,如出現培養基變黃表示細胞需要換液,培養基營養耗盡。

05

凡是在安全柜中打開的瓶子,用完要及時蓋好,避免污染。在瓶蓋打開過程中,盡量不要從其上方經過,避免細菌掉入。

06

做完實驗收拾工作臺,清理垃圾,物品歸位。用酒精擦拭工作臺,打開紫外燈照射20-30分鐘。

 

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