使用奧林巴斯正置熒光顯微鏡 CX33 觀察大腸桿菌，通常需先對大腸桿菌進行熒光染色，再按規范操作顯微鏡進行觀察，具體步驟如下：

樣品準備

培養大腸桿菌：將大腸桿菌接種到適宜的培養基中，如 LB 培養基，在 37℃恒溫培養箱中培養至對數生長期，一般培養時間為 6-8 小時左右。

染色：根據觀察目的選擇合適的熒光染料。若觀察大腸桿菌的 DNA，可使用 DAPI 染料；若觀察特定蛋白，可使用與相應抗體結合的熒光染料。例如用 DAPI 染色時，取少量菌液于載玻片上，滴加適量 DAPI 染液，染色 5-10 分鐘。

制片：染色結束后，蓋上蓋玻片，盡量避免產生氣泡。若菌液過多，可用吸水紙吸去多余液體。

顯微鏡操作

放置與檢查：將顯微鏡平穩放置在實驗臺上，置于身體前方略偏左位置。檢查顯微鏡各部件是否完好，目鏡、物鏡是否清潔，調焦旋鈕、載物臺移動旋鈕等能否正常操作，光源是否能正常發光。

放置裝片：打開載物臺的夾具，將制作好的裝片平穩放置在載物臺上，使樣品位于通光孔的正中央，然后輕輕夾緊裝片。

選擇物鏡：先使用低倍物鏡（如 4× 或 10×）進行初步觀察，便于快速找到樣品并確定觀察區域。

調節光源：開啟顯微鏡電源開關，通過亮度調節旋鈕將光源亮度調至適中，開始時可將亮度調得稍低，再根據觀察情況調整。

調節聚光器和孔徑光闌：調節聚光器的高度，使光線集中照射在樣品上。根據樣品特性和觀察需求調整孔徑光闌大小，低倍觀察時可適當開大，高倍觀察時應縮小，以獲得合適的對比度和分辨率。

粗調對焦：轉動粗調焦旋鈕，使鏡筒緩慢下降，同時從側面觀察物鏡與裝片的距離，直到物鏡接近裝片但不接觸。然后通過目鏡觀察，反向轉動粗調焦旋鈕，使鏡筒緩慢上升，直到看到模糊的圖像。

微調對焦：使用微調焦旋鈕，對圖像進行精細調節，使圖像達到最清晰狀態。

轉換高倍物鏡：若需要更詳細地觀察細節，在低倍物鏡下將感興趣的區域調整到視野中心后，轉動物鏡轉換器，更換高倍物鏡（如 40× 或 100×），更換后通常只需微調焦旋鈕即可使圖像再次清晰。

熒光觀察與記錄

選擇熒光濾光片：根據所使用的熒光染料，選擇相應的熒光濾光片。例如觀察 DAPI 染色的大腸桿菌，需選擇適合 DAPI 激發和發射波長的濾光片。

觀察熒光圖像：通過目鏡觀察大腸桿菌的熒光圖像，調整光源亮度、焦距等，使熒光信號清晰可見。注意觀察熒光的分布、強度等特征。

圖像采集：如果顯微鏡配備了成像系統，將其與顯微鏡正確連接，并打開相應的成像軟件。調整成像軟件中的參數，如曝光時間、增益等，以獲得最佳的熒光圖像效果，然后點擊拍攝按鈕，獲取圖像并保存。