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?iCLIP交聯用哪個波段？
點擊次數：1391 發布時間：2023-5-15
iCLIP交聯用哪個波段？多高能量輻照？
分子生物學的iCLIP實驗，不知道用哪個波段和多少能量輻照，根據使用過紫外交聯儀的老師反饋，iCLIP實驗需要用254nm的紫外交聯儀對細胞進行紫外輻照，UV-C輻照能量為150 mJ/cm2，照射一次。
紫外交聯儀在分子生物學的應用：
在紫外線照射下，在分子水平上，核酸鏈中相鄰的嘧啶可以發生二聚化，這主要發生在胸腺嘧啶堿基4-6之間。近 100 年來，研究人員一直利用紫外線的這一特性作為研究基因突變的工具。
紫外交聯儀應用包括：
1.光穩定性驗證
2.突變生物學（生存分析、紫外線誘導突變、應激分析）
3.聚合物固化（例如甲基丙烯酸酯樹脂、水凝膠）
4.膜交聯（Northern/Southern 印跡，EMSA）
5.微生物滅活（如細菌、真菌、病毒）
6.雙分子交聯（PAR-CLIP-seq、pBpa、CLIP-seq、iCLIP-seq、sulfo-SDA、補骨脂素）
這些應用依賴于可重復的、高強度的紫外線劑量。LUYOR的紫外交聯儀型號是UCL-3200/3500。UCL-3200/3500交聯儀有一個內置高精度紫外福照度計，紫外福照度計可追溯標準進行校準，以確保無論時間和空間如何都能獲得一致的劑量。
紫外交聯儀UCL-3200/UCL-3500的操作
紫外交聯儀UCL-3200/UCL-3500能夠按照時間或能量 J/cm 2為單位進行設置。因紫外線燈管使用壽命、環境溫度、供電電壓等因素會造成紫外線強度會發生變化，建議用戶輻照使用能量設置，盡量不用時間設置。
如果文獻里使用的是能量單位，用戶可以轉換為 J/cm 2，這是該儀器上用于輸入的測量單位。在下面表格里面提供了各種能量單位如何轉換。
如果文獻里面是強度單位，通常以 µW/cm 2為單位，則該值將伴隨曝光時間。用戶必須將輻照能量值轉換為 mW/cm 2，在下面表格里面提供了各種強度單位如何轉換。此外，用戶必須將曝光時間轉換為秒（例如 10 分鐘 = 600 秒）。
例如：
研究人員將某種流感病毒暴露于 2000 uW/cm2 10 分鐘。將報告的紫外線劑量轉換為 J/cm 2。
轉換方法 ：
輻照強度 (mW/cm 2 )* 時間(秒) = 輻照劑量 (mJ/cm 2 )
2 mW/cm 2 * 600 秒 = 1200 (mJ/cm 2 )=1.2 (J/cm 2 )
交聯輻照如何放置輻照樣品？
建議用戶將樣品放置在紫外交聯儀輻照腔的照明中心位置。放置在中心的樣品能確保輻照到到設置的劑量。由于邊緣效應，放置在后面和前面位置的樣本接收的劑量將少于設置的劑量。