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3415熒光蛋白激發光源區分平板上未編輯的和假定的編輯的菌落轉化子
點擊次數：1797 發布時間：2022-9-20
近日，中國科學院天津工業生物技術研究所在《applied microbiology and biotechnology》期刊發表文獻，文獻中指出利用LUYOR-3415熒光蛋白激發光源進行篩選。下面是文獻摘要，文獻全文鏈接在網頁尾部
CRISPR/Cas9系統是一種強大的基因組編輯工具，目前已在一些絲狀真菌中成功應用。但Cas9蛋白對真菌細胞存在的潛在毒性在一定程度上限制了該體系的進一步推廣和應用。AMA1是一種來源于構巢曲霉的自我復制因子，它的衍生載體在沒有抗性選擇的情況下很容易丟失。本研究中，我們利用基于AMA1的Cas9表達載體在無抗篩選條件下的*丟失的特性，消除了Cas9對威尼斯鐮刀菌TB01的毒性。同時，挖掘了兩個可用的用于CRISPR/Cas9系統sgRNA表達的內源性Pol III啟動子(FvU6374和Fv5SrRNA)。與FvU6374(40-50%)相比，Fv5SrRNA具有更高的單基因編輯效率(> 85%)，使用Fv5SrRNA同時編輯兩個基因的效率超過75%。利用上述建立的基因編輯系統，我們刪除了一個編碼丁二醇脫氫酶的基因FvBDH，獲得的突變體菌株乙醇產量比野生型提高了52%。本研究開發的高效CRISPR/Cas9系統為后期通過代謝工程推進威尼斯鐮刀菌TB01的發展奠定了技術基礎；同時，未來通過進一步的遺傳改造和發酵工藝優化后，獲得的FvBDH基因編輯轉化子有望用于菌絲蛋白和乙醇的同步生產。
通過熒光觀察，初步篩選了GFP基因編輯的變異體。使用手持熒光蛋白激發光源LUYOR-3415區分平板上未編輯的（熒光）和假定的編輯的（無熒光）菌落轉化子。轉化板被放置在一個黑暗的環境中。然后，打開激發波長分別為450 nm和500 nm的綠色熒光樹脂激發光源，照亮平板觀察或拍攝菌落轉化子
LUYOR-3415RG便攜式熒光蛋白激發光源能夠觀察GFP、eGFP、dsred、Mcherry、Tdtomato等綠色熒光蛋白和紅色熒光蛋白的表達，我公司針對科研院所免費試用，試用滿意付款。我們在北京、哈爾濱、武漢、鄭州、海口設有代理商，如需演示，請和我們當地代理商聯系。