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上海杰星生物科技有限公司>技術文章>通過病毒外殼蛋白ELISA法測定慢病毒滴度

技術文章

通過病毒外殼蛋白ELISA法測定慢病毒滴度

閱讀:1016          發(fā)布時間:2023-1-30

根據(jù)ZeptoMetrix的p24試驗,默克sigma aldrich確定每毫升慢病毒的轉導單位(TU/mL)。通過使用來自Didier Trono的轉換因子,將p24的濃度轉換為病毒滴度來確定滴度計算方法。每pg p24抗原中有大約1 x 104個慢病毒的物理微粒。根據(jù)ELISA試驗結果,每pg p24抗原中有100個轉導單位(TU)。

材料

· 靶向選定基因的慢病毒

· 來自ZeptoMetrix的p24 ELISA

· 計算器或電子表格程序

實驗方案

1. 稀釋樣品750到3000倍。

2. 使用p24 ELISA試劑盒,并按照制造商的說明進行操作。

3. 永遠用空白對照使讀版器“歸零"。

4. 永遠使用p24標準曲線進行校準。

5. 使用兩種獨立的稀釋液用于制作標準曲線,包括五種濃度和濃度為0的p24。

6. 將標準曲線繪制成p24濃度比OD450。

7. 擬合標準曲線應依從R2> 0.95。

8. 確定斜率m和截距b。(您也可以下載并使用附件中的電子校準表格。)

9. 根據(jù)以下公式計算稀釋病毒的滴度TU/mL(您也可以下載并使用附件中的電子表格。)




注意事項

下載附件中的電子表格(95 Kb)以計算TU/mL。
轉換因子推導:

a. (2×103個分子)×(每PP的24×103 Da p24)=(48×106)
b. 48×106/Avogadro常數(shù)=(48×106)/(6×1023)= 8×10-17 g p24/PP c. 每1×10-16克p24約有1PP d. 每pg p24有1×104 PP
e. 每1000PP有100TU


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