間充質(zhì)干細胞無血清培養(yǎng)基是 為擴增從骨髓、臍帶血或脂肪組織提取的人類間充質(zhì)干細胞（human mesenchymalstem cells, hMSC）而設(shè)計的無血清培養(yǎng)基。該人間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基化學(xué)成分明確，所有組分為化學(xué)合成或重組純化的蛋白，并且無異源蛋白，不含直接從任何動物組織提取成份。因此它不存在批間誤差和潛在的動物源性病原體。如果配合使用特定的培養(yǎng)板（見下），還可以省去鋪板的工序和時間，免去鋪板膠的費用。
一 人間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)基配制：
1. 2‐8℃解凍添加物。
2. 無菌條件下配制100ml間充質(zhì)干細胞無血清*培養(yǎng)基。
3.如果需要也可加入抗菌素（自選）。
配制好的間充質(zhì)干細胞無血清*培養(yǎng)液（包含基礎(chǔ)培養(yǎng)基、添加物、谷氨酸鹽）2-8℃ 避光保存，保存期1 個月。
二 培養(yǎng)基的使用：
培養(yǎng)于其它無血清或有血清培養(yǎng)基的MSCs 可以快捷方便地轉(zhuǎn)換到本品中培養(yǎng)。多數(shù)情況下，生長狀態(tài)良好的MSCs直接換液為本品即可。個別情況下，可能需要逐步轉(zhuǎn)換，如按20%，40%，60%，80%，100%依次遞增，至zui終*使用本品。
三 StemRD hMSCs細胞的復(fù)蘇：
1.37℃水浴快速復(fù)蘇凍融細胞。
2.將細胞轉(zhuǎn)移到無菌50ml離心管中。
3.逐滴向裝有1ml細胞液的離心管中加入10ml預(yù)先復(fù)溫的間充質(zhì)干細胞無血清*培養(yǎng)基，注意邊加邊輕輕晃動離心管。
4.將上述混合溶液轉(zhuǎn)移到細胞培養(yǎng)瓶或細胞培養(yǎng)板中。
5.在5%CO2，37℃培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
6.培養(yǎng)24h，換液。
7.此后每隔2天換液，直到傳代培養(yǎng)。
四 StemRD人間充質(zhì)干細胞無血清培養(yǎng)基傳代培養(yǎng)：
如果使用特定的細胞培養(yǎng)板，如BD PrimariaTM 系列產(chǎn)品或Corning CellBINDTM 系列產(chǎn)品，那么使用本產(chǎn)品培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞是不需要預(yù)先鋪板。傳統(tǒng)的細胞培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)板是否無需鋪板正在評估中。對于那些還沒有被評估的產(chǎn)品或不適用于不預(yù)先鋪板工序的產(chǎn)品，推薦使用人纖維連接蛋白（Fibronectin）進行鋪板。
1.在鏡下觀察（使用本產(chǎn)品或其它培養(yǎng)基）細胞，確定傳代的時間，推薦在細胞量達到70%滿的時候傳代，不要讓細胞超過80%滿！
2.預(yù)先將0.05%胰酶/0.53mM EDTA和間充質(zhì)干細胞無血清*培養(yǎng)基復(fù)溫到37℃待用。
3.用移液槍吸走舊培養(yǎng)基。
4.用DPBS洗一遍（自選）。
5.加入0.05%胰酶/0.53mM EDTA液以覆蓋住細胞表面，推薦室溫消化細胞（消化液用量：6孔板每孔約10cm2加入0.5ml，25cm2培養(yǎng)板加入1ml）。
6. 鏡下觀察細胞，當(dāng)看見細胞開始從培養(yǎng)板底脫離，輕輕敲擊培養(yǎng)板邊緣幫助細胞脫落。消化時間為1‐3分鐘。
7. 加入2倍于消化液體積的間充質(zhì)干細胞無血清*培養(yǎng)基，將細胞懸液收集于15ml離心管中。
8.1200rpm離心10分鐘。
9.盡量棄去離心后的上層清液。用間充質(zhì)干細胞無血清*培養(yǎng)基重懸細胞。此時可取細胞懸液進行細胞計數(shù)。
10.按照3-5X103/cm2密度接種細胞。
11.5%CO2，37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
12.每隔2天換新鮮的間充質(zhì)干細胞無血清*培養(yǎng)基。
13.當(dāng)細胞生長達到70%滿時，傳代（一般每隔3-4天）。
五 凍存細胞：
1.配制細胞凍存液。
2.離心分離細胞，用凍存液重懸細胞。
3.將凍存管轉(zhuǎn)移到凍存盒中，置于-80℃冰箱。
4.將細胞轉(zhuǎn)移到液氮罐中長期貯存。
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