目錄:上海乾思生物科技有限公司>>細胞>>細胞系>> BY-1352247C-B4Z2-01-C-005重組中國倉鼠卵巢細胞系
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來源與構建：該細胞系以 CHO-K1 為親本，采用同源重組技術將含 B4Z2 啟動子、目的基因多克隆位點及 hygromycin 抗性基因的表達框定點整合至 CHO 基因組安全位點。名稱中 “247C-B4Z2-01-C-005" 為克隆篩選標識，其中 “B4Z2" 代表核心調控元件 —— 一種受四環素類似物誘導的啟動子，可通過添加 doxycycline 實現蛋白表達的時空調控。構建過程中采用絕緣子序列優化，使外源基因表達波動幅度控制在 5% 以內。
形態與增殖：體外培養呈典型上皮樣形態，貼壁生長時呈多角形，排列緊密；懸浮培養形成直徑 20-40μm 的松散聚集體，細胞輪廓清晰，活力長期維持在 92% 以上。37℃、5% CO?條件下，增殖周期約 30-36 小時，適應無血清化學限定培養基（如 HyClone SFM4CHO），傳代 100 次以上仍保持穩定生長速率，誘導后目標蛋白表達量衰減＜7%，凍存復蘇后存活率超 88%。
功能特征：該細胞系的核心優勢在于 B4Z2 啟動子的誘導調控特性：未誘導狀態下，目標蛋白基礎表達量＜0.1μg/mL；添加 1μg/mL doxycycline 后，24 小時內表達量快速升至 2-4g/L（流加培養），誘導倍數達 50-100 倍（ELISA 檢測），且誘導效率與誘導劑濃度呈線性相關（有效范圍 0.01-5μg/mL），可精準控制蛋白合成時機，減少毒性蛋白對細胞的損傷。
重組蛋白可控生產
生物藥工藝優化
表達系統穩定性驗證
貼壁培養操作：
復蘇：從液氮取出凍存管，37℃水浴 1-2 分鐘解凍，轉移至含 10mL 預熱培養基（DMEM/F12+10% 胎牛血清 + 200μg/mL hygromycin）的離心管，1000rpm 離心 5 分鐘，重懸后接種至 T75 培養瓶，37℃、5% CO?培養箱靜置培養。
換液：接種 24 小時后首ci換液，去除未貼壁細胞，此后每 48 小時換液一次，維持細胞融合度＜80% 以保持活性。
傳代：當細胞融合度達 70%-80% 時，棄培養基，PBS 清洗 2 次，加入 2mL 0.25% yi酶 - EDTA，37℃孵育 3 分鐘，鏡檢細胞脫落后加入 8mL 培養基終止消化，按 1:4 比例傳代，避免過度密集影響誘導效率。
懸浮誘導培養：
種子準備：將貼壁細胞消化后，以 3×10?個 /mL 密度接種至搖瓶，使用無血清培養基（如 CD FortiCHO），120rpm、37℃、5% CO?培養至密度 4×10?個 /mL。
誘導表達：添加 doxycycline 至終濃度 1μg/mL，繼續培養 7-10 天，每日取樣監測細胞密度與活力，當活力＜70% 時收獲上清。
蛋白純化：上清經 0.22μm 濾膜過濾后，根據目標蛋白特性選擇親和層析（如 Protein A/G）或離子交換層析純化，純度可達 98% 以上。
凍存流程：取對數生長期細胞，1000rpm 離心 5 分鐘，用凍存液（80% 無血清培養基 + 10% 胎牛血清 + 10% DMSO）重懸至 5×10?個 /mL，分裝至凍存管，程序降溫盒 - 80℃過夜，次日轉移至液氮保存，保存期可達 5 年以上。
優勢：B4Z2 啟動子誘導響應精準，基礎表達極低（＜0.1% 誘導表達量）；定點整合確保表達穩定性，傳代 60 次無明顯衰減；兼容貼壁與懸浮培養，可無縫放大至生物反應器；產物糖基化修飾均一，批間差異＜5%，符合生物藥質量要求。
局限性：誘導劑 doxycycline 可能殘留于產物中，需優化純化工藝去除；高誘導強度下（＞5μg/mL）可能抑制細胞增殖，需控制誘導濃度；構建周期長（約 3 個月），初始篩選成本較高。
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