目錄:上海乾思生物科技有限公司>>細胞>>細胞系>> BY-1355CHO-DHFR+中國倉鼠卵巢細胞系
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來源與遺傳背景：該細胞系源自 CHO-K1 細胞的天然篩選克隆，區別于 DHFR 缺陷型（DHFR?）細胞，其保留功能性 DHFR 基因，可自主合成四氫ye酸（相關代謝的關鍵中間產物），無需外源性胸苷補充。名稱中 “DHFR+" 直接標識其核心代謝特征 ——DHFR 基因功能正常，這一特性使其在無選擇壓力條件下仍能穩定增殖，避免了 DHFR?細胞對培養基成分的嚴苛依賴。
形態與增殖：體外培養呈典型上皮樣形態，貼壁生長時呈多角形，排列緊密；懸浮培養形成直徑 30-80μm 的聚集體，細胞圓潤飽滿，活力長期維持在 91% 以上。37℃、5% CO?條件下，增殖周期約 28-34 小時，兼容含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培養基與多種無血清培養基，傳代 100 次以上生長速率衰減＜8%，相關合成能力無明顯下降，凍存復蘇后存活率超 88%。
功能特征：核心優勢在于 DHFR 介導的基因擴增潛力：當攜帶 DHFR 基因與目標基因的表達載體轉染后，在特定抑制劑逐步加壓篩選下，可通過基因共擴增機制使外源基因拷貝數增加 10-100 倍，目標蛋白表達量隨之提升 5-20 倍（ELISA 檢測）。與 DHFR?細胞相比，其無需預先敲除內源性 DHFR，基因編輯步驟簡化 40%，且擴增過程中細胞存活率提高 25%-30%。
重組蛋白高效生產
基因擴增機制研究
相關代謝藥物篩選
基礎培養操作：
復蘇：凍存管 37℃水浴解凍后，轉移至含 10mL DMEM/F12+10% 胎牛血清的離心管，1000rpm 離心 5 分鐘，重懸后接種 T75 瓶，37℃、5% CO?培養，48 小時內貼壁率超 90%。
傳代：當細胞融合度達 70%-80% 時，棄培養基，PBS 清洗 2 次，加入 2mL 細胞解離液，37℃孵育 3 分鐘，鏡檢細胞脫落后加入 8mL 培養基終止解離，按 1:5 比例傳代，避免過度密集影響擴增效率。
基因擴增與篩選：
轉染與篩選：采用脂質體轉染法導入含 DHFR 與目標基因的表達載體，48 小時后換用含 0.01μM 特定抑制劑的選擇培養基，每 3-4 天換液一次，存活克隆形成后挑取單克隆。
梯度加壓：將陽性克隆逐步轉移至含 0.1μM、1μM 特定抑制劑的培養基中，每輪篩選持續 2 周，通過 ELISA 檢測目標蛋白表達量，保留高表達克隆。
擴增后培養：穩定克隆可在含 0.1μM 特定抑制劑的培養基中傳代維持，或在無特定抑制劑條件下短期培養（＜10 代），表達量衰減＜10%。
凍存流程：取對數生長期細胞，1000rpm 離心 5 分鐘，用凍存液（70% wan全培養基 + 20% 胎牛血清 + 10% DMSO）重懸至 5×10?個 /mL，程序降溫盒 - 80℃過夜，次日轉移至液氮保存，保存期可達 5 年以上，復蘇后需在含特定抑制劑的培養基中恢復 2-3 代以穩定表達。
優勢：無需敲除內源性 DHFR，基因操作簡便；特定抑制劑加壓下細胞存活率高，陽性克隆篩選效率提升 30%；相關代謝通路完整，可用于代謝相關研究；擴增后的表達穩定性優于 DHFR?細胞（傳代 50 次衰減＜15%）。
局限性：基礎表達量低于工程化 CHO 株系；高濃度特定抑制劑（＞1μM）下細胞形態易發生畸變；擴增過程耗時較長（需 6-8 周），快速篩選需求受限。
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