RNBEC/HL-033大鼠正常膀胱上皮細(xì)胞系
RNBEC/HL-033大鼠正常膀胱上皮細(xì)胞系作為源自大鼠膀胱黏膜的上皮細(xì)胞模型，因保留膀胱上皮te有的屏障功能與分泌特性，在膀胱生理功能調(diào)控、尿路疾病機(jī)制及損傷修復(fù)研究中具有重要價(jià)值，成為探究膀胱上皮細(xì)胞生物學(xué)特性及相關(guān)疾病的關(guān)鍵實(shí)驗(yàn)工具。
細(xì)胞特性與來源背景：該細(xì)胞系源自大鼠膀胱黏膜的移行上皮組織，經(jīng)原代培養(yǎng)和純化獲得。細(xì)胞形態(tài)呈典型上皮樣，多為多邊形或立方形，胞體大小均勻（直徑約 18-22μm），胞質(zhì)豐富且呈嗜酸性，可見大量橋粒結(jié)構(gòu)和中間絲，約 15% 細(xì)胞呈現(xiàn)雙核特征，細(xì)胞核呈圓形或橢圓形，位于細(xì)胞中央，核仁清晰。生長方式為貼壁生長，呈單層 “鋪路石" 樣排列，具有明顯的接觸抑制現(xiàn)象，傳代后 24 小時(shí)貼壁率達(dá) 94%。核心參數(shù)符合正常膀胱上皮細(xì)胞特征：倍增時(shí)間約 65 小時(shí)，連續(xù)傳代 20 次后仍保持穩(wěn)定的生物學(xué)特性；表面標(biāo)志物表達(dá)du特，細(xì)胞角蛋白 13（CK13）陽性率達(dá) 95%，膀胱上皮特異性標(biāo)志物 uroplakin III 陽性率 93%，緊密連接蛋白 occludin 陽性率 91%；具有正常的二倍體核型（染色體數(shù) 42 條），無染色體畸變；屏障功能顯著，跨上皮電阻（TEER）值達(dá) 450Ω?cm2，對尿素的通透性僅為 0.25μL/(h?cm2)；分泌功能活躍，黏蛋白（MUC5AC）基礎(chǔ)分泌量達(dá) 32ng/mL，防御素 β2 分泌量達(dá) 18pg/mL；無微生物污染，細(xì)胞純度達(dá) 97%，保障實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。
科研應(yīng)用價(jià)值：在膀胱屏障功能研究中，RNBEC/HL-033 細(xì)胞經(jīng)脂多糖（LPS）處理 48 小時(shí)后，緊密連接蛋白 claudin-4 表達(dá)量下降 55%，跨上皮電阻值降低 60%，細(xì)菌黏附率增加 4.2 倍，可模擬膀胱炎狀態(tài)下膀胱上皮屏障的破壞過程，為解析膀胱黏膜防御機(jī)制提供理想模型。
膀胱損傷修復(fù)研究方面，該細(xì)胞經(jīng)硝suan銀（膀胱損傷誘導(dǎo)劑）處理后，乳酸脫氫酶（LDH）釋放量增加 4.8 倍，損傷區(qū)域面積占比達(dá) 38%，增殖相關(guān)基因 Ki67 表達(dá)量提升 50%；而經(jīng)表皮生長因子（EGF）處理后，細(xì)胞遷移速率增加 60%，損傷修復(fù)率提升 45%，可模擬化學(xué)性膀胱損傷及修復(fù)過程，適用于探究膀胱上皮再生機(jī)制。
尿路疾病研究領(lǐng)域，該細(xì)胞經(jīng)高濃度尿液溶質(zhì)（尿酸鹽結(jié)晶 500μmol/L）處理后，炎癥因子 IL-8 分泌量增加 5.2 倍，活性氧（ROS）水平提升 65%，細(xì)胞凋亡率達(dá) 35%，能很好地模擬膀胱結(jié)石引起的上皮損傷，為探究尿路結(jié)石相關(guān)膀胱炎的發(fā)病機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。此外，該細(xì)胞與膀胱平滑肌細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)，平滑肌細(xì)胞的收縮相關(guān)蛋白 MLCK 表達(dá)量增加 3 倍，可用于探究上皮 - 平滑肌相互作用在膀胱功能調(diào)控中的機(jī)制。
培養(yǎng)與保存規(guī)范：推薦使用含 15% 胎牛血清的 Keratinocyte-SFM 培養(yǎng)基，添加 0.1ng/mL 表皮生長因子（EGF）、0.5μg/mL 氫化ke的松及 1% 抗生素混合液，培養(yǎng)環(huán)境為 37℃、5% CO?飽和濕度培養(yǎng)箱。培養(yǎng)基需每 2 天更換一次，以維持細(xì)胞的屏障功能和分泌活性。傳代時(shí)，用 PBS 沖洗細(xì)胞 2 次，加入專用上皮細(xì)胞解離液，37℃孵育 8-10 分鐘，待細(xì)胞邊緣收縮后輕輕吹打使細(xì)胞脫落，傳代比例為 1:2-1:3，每 5-6 天傳代一次，避免過度傳代導(dǎo)致分化標(biāo)志物表達(dá)下降。
凍存液采用培養(yǎng)基 + 10% DMSO+20% 胎牛血清的混合液，細(xì)胞濃度調(diào)整為 3×10?個(gè) /ml，經(jīng)程序降溫（-20℃1 小時(shí)→-80℃過夜→液氮保存）后，復(fù)蘇存活率達(dá) 85% 以上，3-4 代內(nèi)可恢復(fù)正常的生長和屏障功能。運(yùn)輸采用干冰冷凍運(yùn)輸或培養(yǎng)瓶活細(xì)胞運(yùn)輸，收到細(xì)胞后需靜置培養(yǎng) 24 小時(shí)，更換培養(yǎng)基后觀察細(xì)胞形態(tài)，確認(rèn)無異常漂浮物且排列緊密后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。該細(xì)胞系僅限科研使用，操作時(shí)需避免頻繁更換培養(yǎng)溫度，以防影響緊密連接的穩(wěn)定性。
RNBEC/HL-033 大鼠正常膀胱上皮細(xì)胞系以其穩(wěn)定的膀胱上皮特性、完整的屏障功能及典型的損傷應(yīng)答能力，在膀胱生物學(xué)研究與尿路疾病機(jī)制探索中發(fā)揮著重要作用，為揭示膀胱疾病的發(fā)病機(jī)制和開發(fā)膀胱保護(hù)藥物提供了可靠的細(xì)胞模型。
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