MLE-12小鼠肺上皮細(xì)胞系
MLE-12小鼠肺上皮細(xì)胞系源自轉(zhuǎn)基因小鼠的肺組織，是研究肺上皮細(xì)胞功能與肺部疾病的重要模型。該細(xì)胞系保留了肺泡 Ⅱ 型上皮細(xì)胞的關(guān)鍵特性，如分泌表面活性物質(zhì)、參與氣體交換調(diào)節(jié)等，為探索肺組織穩(wěn)態(tài)維持、損傷修復(fù)及相關(guān)疾病機(jī)制提供了穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)載體。
在顯微鏡下，MLE-12 細(xì)胞呈貼壁生長(zhǎng)，形態(tài)以立方形或多邊形為主，細(xì)胞排列緊密，宛如覆蓋在培養(yǎng)表面的 “肺泡上皮層"。細(xì)胞邊界清晰，胞質(zhì)豐富，內(nèi)含特征性的板層小體 —— 這是肺泡 Ⅱ 型細(xì)胞儲(chǔ)存表面活性物質(zhì)的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)，通過(guò)電鏡可觀察到多層膜結(jié)構(gòu)的板層小體。細(xì)胞直徑約 10-15 微米，核呈圓形或橢圓形，位于細(xì)胞中央，核仁清晰。該細(xì)胞增殖速度中等，倍增時(shí)間約 48-72 小時(shí)，當(dāng)融合度達(dá)到 80% 左右時(shí)需進(jìn)行傳代，傳代時(shí)用 0.25% 胰dan白酶 - EDTA 混合液消化 3-5 分鐘，按 1:3-1:5 比例接種，傳代周期穩(wěn)定，可在體外長(zhǎng)期培養(yǎng)仍保持肺上皮細(xì)胞的表型。
培養(yǎng) MLE-12 細(xì)胞需模擬肺部生理環(huán)境。基礎(chǔ)培養(yǎng)基常選用 DMEM/F12 混合培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)成分均衡，能滿足肺上皮細(xì)胞的代謝需求；添加 2% 胎牛血清（FBS）—— 相較于其他細(xì)胞系，低血清濃度更利于維持其上皮特性，同時(shí)需加入胰島素 - 轉(zhuǎn)鐵蛋白 - 硒（ITS）混合添加劑，為細(xì)胞提供必需的微量元素和生長(zhǎng)因子。培養(yǎng)箱需維持在 37℃、5% CO?的條件下，pH 值控制在 7.2-7.4，通過(guò)培養(yǎng)基中的酚紅指示劑可直觀監(jiān)測(cè)酸堿變化。值得注意的是，該細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)環(huán)境中的氧氣濃度較為敏感，低氧條件（如 5% 氧氣）可模擬肺部缺氧病理狀態(tài)，用于研究缺氧對(duì)細(xì)胞功能的影響。
在肺上皮細(xì)胞功能研究中，MLE-12 細(xì)胞系是解析表面活性物質(zhì)合成與分泌機(jī)制的核心工具。表面活性物質(zhì)由肺泡 Ⅱ 型細(xì)胞分泌，主要成分為磷脂和表面活性蛋白（如 SP-A、SP-B、SP-C、SP-D），其作用是降低肺泡表面張力，防止肺泡塌陷。MLE-12 細(xì)胞保留了合成和分泌這些物質(zhì)的能力，科研人員通過(guò)檢測(cè)不同刺激條件下表面活性蛋白的表達(dá)水平和磷脂含量，可探索其調(diào)控機(jī)制。例如，糖皮質(zhì)激素可上調(diào) MLE-12 細(xì)胞中 SP-B 的表達(dá)，這一過(guò)程與糖皮質(zhì)激素受體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄激活相關(guān)，為新生兒呼吸窘迫綜合征的激素治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
在肺部疾病模型研究中，MLE-12 細(xì)胞系可模擬多種肺部疾病的病理狀態(tài)。在急性肺損傷（ALI）模型中，用脂多糖（LPS）或腫瘤壞死因子 -α（TNF-α）刺激細(xì)胞，可誘導(dǎo)細(xì)胞分泌炎癥因子（如 IL-6、IL-8），模擬炎癥狀態(tài)下肺上皮細(xì)胞的反應(yīng)，研究炎癥信號(hào)通路（如 NF-κB、MAPK）的激活機(jī)制；在肺纖維化模型中，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子 -β1（TGF-β1）可誘導(dǎo) MLE-12 細(xì)胞向肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化，觀察到 α- 平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）表達(dá)增加、膠原蛋白分泌增多，模擬肺纖維化過(guò)程中的上皮 - 間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）現(xiàn)象，為研究肺纖維化的分子機(jī)制提供體外模型。
在呼吸系統(tǒng)藥物篩選領(lǐng)域，MLE-12 細(xì)胞系是評(píng)估藥物對(duì)肺上皮細(xì)胞保護(hù)作用的重要模型。通過(guò)檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞存活率、炎癥因子分泌、表面活性物質(zhì)合成等的影響，可篩選有效的候選藥物。例如，中藥成分huang芩苷可抑制 LPS 誘導(dǎo)的 MLE-12 細(xì)胞炎癥因子釋放，其機(jī)制與抑制 NF-κB 信號(hào)通路激活相關(guān)，這一發(fā)現(xiàn)為急性肺損傷的中藥治療提供了實(shí)驗(yàn)支持。此外，該細(xì)胞系還可用于評(píng)估吸入性藥物的毒性，通過(guò)檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞形態(tài)、活性及功能的影響，判斷藥物的肺部安全性，為藥物研發(fā)提供參考。
在肺部感染研究中，MLE-12 細(xì)胞系可用于模擬病毒或細(xì)菌感染肺部的過(guò)程。流感病毒、肺炎鏈球菌等病原體可侵襲肺上皮細(xì)胞，利用 MLE-12 細(xì)胞可研究病原體的感染機(jī)制、細(xì)胞的抗病毒或抗菌免疫反應(yīng)。例如，流感病毒感染 MLE-12 細(xì)胞后，可誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生干擾素（IFN），激活抗病毒信號(hào)通路，通過(guò)檢測(cè)這些信號(hào)分子的表達(dá)變化，可探索病毒與宿主細(xì)胞的相互作用，為抗病du藥物的研發(fā)提供靶點(diǎn)。
前沿研究中，MLE-12 細(xì)胞系的應(yīng)用不斷拓展。在類器官構(gòu)建中，將其與肺成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞共培養(yǎng)，可形成三維 “肺類器官"，更真實(shí)地模擬肺組織的結(jié)構(gòu)和功能，用于研究肺部疾病的發(fā)生發(fā)展及藥物的作用效果；在單細(xì)胞測(cè)序研究中，通過(guò)解析細(xì)胞在不同病理狀態(tài)下的基因表達(dá)變化，可發(fā)現(xiàn)新的疾病標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)；在基因編輯研究中，利用 CRISPR 技術(shù)調(diào)控 MLE-12 細(xì)胞中特定基因的表達(dá)，可深入探究這些基因在肺上皮細(xì)胞功能及肺部疾病中的作用，為肺部疾病的精準(zhǔn)治療提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
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