H22小鼠肝癌細胞系
H22小鼠肝癌細胞系是研究肝癌惡性生物學行為的經典模型，以高成瘤率、強體內轉移能力及穩定的遺傳特性為核心優勢，在肝癌增殖機制、轉移路徑及藥物篩選中應用廣泛，為解析肝癌的發病機制及治療策略提供了可靠實驗載體。
來源與背景：該細胞系源自昆明小鼠自發產生的肝細胞癌組織，于 20 世紀 60 年代建立。在臨床肝癌中，肝細胞癌占比約 85%-90%，具有起病隱匿、進展迅速、預后差的特點。H22 細胞系因能在同源小鼠體內穩定成瘤并模擬肝癌的侵襲轉移過程，彌補了部分人類肝癌細胞系在小鼠體內成瘤率低的不足。作為可直接用于小鼠接種的肝癌模型，其體內生長特性與臨床肝癌進展過程高度相似，至今仍是肝癌在體實驗研究中使用zui廣泛的細胞系之一。
細胞特性：形態上呈現典型的上皮樣與多邊形混合特征，貼壁生長時呈不規則形態，細胞質豐富，可見嗜酸性顆粒，細胞核大而畸形，核仁明顯，核質比約 1:1.2，多核細胞比例約 15%，體現肝癌細胞的惡性形態。核心特性包括：強成瘤與轉移能力，體外培養倍增時間約 24-30 小時，克隆形成率達 75%，昆明小鼠皮下接種 1×10?細胞后，7 天成瘤率 100%，21 天腫瘤體積可達 2.2cm3；腹腔注射后肝內轉移率達 90%，常伴隨腹水形成，模擬臨床肝癌的肝內轉移特征。分子特征明確，高表達甲胎蛋白（AFP），其含量是正常肝細胞的 8 倍，是肝癌診斷的重要標志物；同時攜帶 p53 基因突變，導致 p53 蛋白功能異常，細胞凋亡抵抗能力增強，對hua療藥物的敏感性降低。傳代時用常規消化液處理 3-5 分鐘，傳代比例 1:3-1:6，連續傳代 50 次后仍保持成瘤能力和惡性表型，遺傳穩定性良好。
培養條件：適宜采用含 10% 胎牛血清的 RPMI-1640 培養基，添加 1% 雙抗，培養環境需控制在 37℃、5% CO?飽和濕度。細胞密度維持在 20%-70%，當密度超過 85% 時，細胞增殖速率下降 35%，且形態會出現一定程度的改變。對血清質量較為敏感，優質血清可促進細胞的增殖和保持惡性表型，低質量血清會使細胞凋亡率從 5% 升至 28%。凍存推薦使用含 10% DMSO 的胎牛血清凍存液，程序降溫后液氮保存，復蘇后 24 小時貼壁率達 88%，72 小時可wan全恢復增殖活性。
檢測鑒定：經微生物篩查，無支原體、細菌、真菌污染，符合實驗細胞質量標準。免疫組化顯示 AFP 陽性、細胞角蛋白 18（CK18）陽性，符合肝細胞癌的免疫表型。基因測序證實存在 p53 基因突變，無 EGFR、KRAS 等其他常見驅動基因突變，與部分肝細胞癌患者的分子特征一致。染色體核型分析呈現亞三倍體核型（眾數 60-64），存在多條染色體的異常，與臨床肝細胞癌的染色體改變模式相符。功能驗證中，昆明小鼠皮下接種后形成的腫瘤組織病理形態與人類肝細胞癌高度相似，免疫組化顯示 Ki-67 陽性率達 80%，證實其高增殖活性。
應用領域：在增殖機制研究中，通過該細胞系發現 PI3K/Akt 信號通路異常激活可促進肝癌細胞增殖，磷酸化 Akt 水平是正常肝細胞的 4 倍，抑制該通路可使細胞增殖率下降 60%，為闡明肝癌的增殖機制提供了重要依據。在轉移機制研究中，利用其肝內轉移模型，發現基質金屬蛋白酶 - 9（MMP-9）在腫瘤轉移中起關鍵作用，抑制 MMP-9 可使肝內轉移灶數量減少 70%，揭示了 MMP-9 在肝癌轉移中的作用。在藥物研發方面，作為篩選抗肝癌藥物的模型，新型靶向藥物可使 H22 細胞增殖抑制率達 80%，且能使裸鼠移植瘤體積縮小 75%。此外，該細胞系可用于腫瘤微環境研究，發現腫瘤相關巨噬細胞分泌的 IL-6 可使 H22 細胞的侵襲能力增強 2.8 倍，為靶向腫瘤微環境的聯合治療提供實驗基礎。
與其他肝癌細胞系相比，H22 細胞系的優勢在于其能穩定模擬肝細胞癌的惡性生物學行為，在同源小鼠體內的成瘤和轉移特性好，實驗重復性高。通過對該細胞系的研究，已闡明 20 余個與肝癌增殖、轉移相關的關鍵基因，推動了 6 種抗肝癌藥物進入臨床前試驗，為肝癌的診斷和治療提供了重要實驗依據。
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