DCS小鼠樹突狀細胞肉瘤瘤株細胞系
DCS小鼠樹突狀細胞肉瘤瘤株細胞系源自 C57BL/6 小鼠的自發(fā)性樹突狀細胞肉瘤，是保留樹突狀細胞抗原呈遞功能異常及淋巴組織浸潤特性的罕見惡性腫瘤模型，在樹突狀細胞肉瘤的免疫逃逸機制、淋巴轉(zhuǎn)移規(guī)律及免疫靶向藥物篩選中具有du特jia值，為解析這種起源于抗原呈遞細胞的惡性腫瘤提供了關(guān)鍵工具。
該細胞系呈現(xiàn)典型的樹突狀細胞肉瘤雙相形態(tài)與表型特征。顯微鏡下，細胞同時存在兩種形態(tài)：多數(shù)為不規(guī)則形樹突狀細胞，具有細長胞質(zhì)突起（長度可達細胞直徑的 3-5 倍）；少數(shù)為圓形免疫母細胞樣細胞，兩種細胞比例約 3:1。細胞核呈腎形或不規(guī)則形，核質(zhì)比中等，染色質(zhì)呈細網(wǎng)狀，可見 1-2 個明顯核仁，核分裂象每 10 個高倍視野 4-6 個，胞質(zhì)豐富，呈弱嗜堿性，電鏡下可見胞質(zhì)內(nèi)含有豐富的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，符合樹突狀細胞的超微結(jié)構(gòu)特點。免疫表型分析顯示，細胞高表達樹突狀細胞標志物 CD11c 和 CD83（陽性率分別為 88% 和 82%），同時異常表達共刺激分子 CD80 和 CD86（表達量較正常樹突狀細胞高 2 倍），但抗原呈遞關(guān)鍵分子 MHC-Ⅱ 類分子表達下調(diào) 40%，這種表型特征使其既保留樹突狀細胞形態(tài)，又喪失正常抗原呈遞功能。
體外培養(yǎng)體系中，DCS 細胞展現(xiàn)出du特的增殖模式與侵襲特性。最適培養(yǎng)條件為含 15% 胎牛血清的 RPMI 1640 培養(yǎng)基，添加 20ng/mL GM-CSF，在 37℃、5% CO?環(huán)境下，傳代周期約 72 小時，倍增時間約 48 小時，顯著慢于其他肉瘤細胞系。其顯著特點是體外可形成松散的細胞網(wǎng)絡(luò)，樹突狀突起相互連接形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，這種特性與其高表達細胞間黏附分子 ICAM-1 相關(guān)（表達量是正常樹突狀細胞的 1.8 倍）。Transwell 侵襲實驗顯示，其穿透淋巴組織基質(zhì)的能力是正常樹突狀細胞的 6 倍，這種侵襲性依賴于高表達的 MMP-14（膜型基質(zhì)金屬蛋白酶），酶活性較正常細胞高 5 倍，可特異性降解淋巴濾泡的網(wǎng)狀纖維。軟瓊脂克隆形成率達 30%，克隆形態(tài)呈不規(guī)則網(wǎng)狀，連續(xù)傳代 40 次后，CD11c 表達及突起結(jié)構(gòu)無明顯衰減，凍存復(fù)蘇存活率超 85%。
在動物模型中，DCS 細胞的成瘤與浸潤模式精準模擬人類樹突狀細胞肉瘤。將 1×10?個細胞皮下接種 C57BL/6 小鼠，10 天形成實體瘤，20 天區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率達 75%，30 天脾臟和骨髓浸潤率分別為 60% 和 40%，與人類病例的淋巴造血組織偏好性轉(zhuǎn)移高度一致。病理切片顯示腫瘤組織內(nèi)樹突狀細胞與免疫母細胞樣細胞混雜分布，免疫組化可見 CD11c 陽性細胞穿插于淋巴濾泡中，破壞正常淋巴結(jié)構(gòu)。熒光追蹤顯示，細胞通過淋巴循環(huán)首先定植于淋巴結(jié)副皮質(zhì)區(qū)，依賴 CCR7-CCL19 趨化軸與 T 細胞區(qū)基質(zhì)細胞結(jié)合，CCR7 拮抗劑處理可使淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率下降 65%。
發(fā)病機制研究揭示其te有的分子異常。基因測序顯示，細胞存在 NF-κB 通路持續(xù)激活，p65 亞基磷酸化水平是正常樹突狀細胞的 4 倍，導(dǎo)致 IL-6 和 TNF-α 異常分泌（分別增加 3 倍和 2.5 倍），形成自分泌促增殖環(huán)路，NF-κB 抑制劑處理可使細胞增殖率下降 55%。與正常樹突狀細胞相比，其 Toll 樣受體 4（TLR4）表達缺失，導(dǎo)致脂多糖（LPS）刺激后無法激活抗原呈遞相關(guān)基因，這種天然免疫識別功能缺陷使其逃避宿主免疫監(jiān)視，TLR4 過表達后可恢復(fù)部分抗原呈遞功能，使腫瘤生長速率減慢 40%。
轉(zhuǎn)移機制方面，DCS 細胞的淋巴轉(zhuǎn)移涉及免疫微環(huán)境重塑。除 CCR7 介導(dǎo)的定向遷移外，細胞可招募調(diào)節(jié)性 T 細胞（Treg），通過分泌 IL-10 誘導(dǎo) Treg 在腫瘤微環(huán)境聚集（比例增加 2.5 倍），Treg 分泌的 TGF-β 進一步增強腫瘤細胞的侵襲能力，IL-10 中和抗體處理可使 Treg 浸潤減少 50%，轉(zhuǎn)移率下降 45%。代謝組學(xué)分析顯示，其依賴氧化磷酸化供能，淋巴組織中豐富的線粒體底物可促進轉(zhuǎn)移灶生長，線粒體抑制劑處理使轉(zhuǎn)移灶體積縮小 50%。
在藥物篩選應(yīng)用中，該細胞系為免疫聯(lián)合治療提供實驗依據(jù)。體外實驗顯示，抗 CD11c 單克隆抗體可靶向結(jié)合腫瘤細胞，介導(dǎo)抗體依賴的細胞毒性作用（ADCC），殺傷率達 60%，聯(lián)合 PD-1 抑制劑可提升至 75%，這種協(xié)同效應(yīng)與恢復(fù) T 細胞對腫瘤細胞的識別相關(guān)。體內(nèi)實驗證實，雙藥聯(lián)合可使 C57BL/6 小鼠皮下瘤體積縮小 65%，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率從 75% 降至 30%，生存期延長 50%。因其保留部分樹突狀細胞特性，還可用于篩選腫瘤疫苗佐劑，某新型 TLR7 激動劑可部分恢復(fù)其抗原呈遞功能，使腫瘤特異性 T 細胞增殖增加 3 倍。
腫瘤微環(huán)境研究發(fā)現(xiàn)，DCS 細胞與巨噬細胞的交叉調(diào)控促進腫瘤進展。共培養(yǎng)實驗顯示，腫瘤細胞分泌的 M-CSF 可誘導(dǎo)巨噬細胞向 M2 型極化，M2 型巨噬細胞分泌的 IL-1β 反過來激活腫瘤細胞的 MAPK 通路，使侵襲能力增強 50%，M-CSF 中和抗體可阻斷這種互作環(huán)路。在缺氧條件下（2% O?），細胞 HIF-2α 表達上調(diào)，誘導(dǎo)血管生成因子 Ang-2 分泌增加，使腫瘤內(nèi)新生血管密度增加 2 倍，Ang-2 抗體處理可抑制腫瘤生長及轉(zhuǎn)移。
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