NIH/3T3小鼠胚胎成纖維細胞系
NIH/3T3小鼠胚胎成纖維細胞系源自 1962 年美國國立衛(wèi)生研究院（NIH）從瑞士小鼠胚胎中分離建立的成纖維細胞系，因嚴格的傳代規(guī)范（每 3 天傳代一次，每次接種 3×10?細胞）而得名，是細胞生物學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用zui廣泛的經(jīng)典模型之一。
該細胞系保留了成纖維細胞的典型生物學(xué)特征。細胞呈長梭形或紡錘形，胞質(zhì)豐富，細胞核呈橢圓形，在光學(xué)顯微鏡下可見清晰的細胞輪廓。作為貼壁生長細胞，其能分泌膠原蛋白、纖連蛋白等細胞外基質(zhì)成分，形成致密的細胞單層，當細胞密度達到 80%-90% 匯合時，會因接觸抑制現(xiàn)象停止增殖，這一特性與正常體細胞的生長調(diào)控機制高度一致，使其成為研究細胞增殖與接觸抑制的理想模型。此外，NIH/3T3 細胞表達成纖維細胞特異性標志物波形蛋白（Vimentin），不表達上皮細胞標志物細胞角蛋白（Cytokeratin），可通過免疫熒光染色明確其細胞類型。
在體外培養(yǎng)體系中，NIH/3T3 細胞展現(xiàn)出優(yōu)異的穩(wěn)定性和可操作性。在含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)基中，37℃、5% CO?條件下生長良好，傳代周期約 48-72 小時，凍存復(fù)蘇后的存活率可達 90% 以上。與原代胚胎成纖維細胞相比，其克服了原代細胞傳代次數(shù)有限（通常不超過 15 代）、功能易退化的缺陷，連續(xù)傳代 50 次后仍能保持穩(wěn)定的生長特性和接觸抑制能力，且細胞群體均一性高，能有效減少實驗誤差，適合開展標準化研究。
NIH/3T3 細胞的顯著優(yōu)勢在于其對轉(zhuǎn)化事件的高度敏感性。當受到致癌病毒（如 SV40 病毒）、致癌基因（如 Ras、Src）或化學(xué)致癌物處理時，會失去接觸抑制特性，形成多層生長的細胞集落，即發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。這種轉(zhuǎn)化表型可通過軟瓊脂克隆形成實驗驗證 —— 正常細胞無法在軟瓊脂中生長，而轉(zhuǎn)化后的細胞能形成懸浮克隆，這一特征使其成為研究細胞癌變機制的黃金模型。
在應(yīng)用領(lǐng)域，NIH/3T3 細胞的價值貫穿多個研究方向。在腫瘤學(xué)研究中，通過將候選致癌基因?qū)爰毎^察其是否誘導(dǎo)轉(zhuǎn)化表型，可驗證基因的致癌潛能；在信號通路研究中，利用其對生長因子（如 PDGF、EGF）的應(yīng)答特性，解析細胞增殖信號的傳導(dǎo)網(wǎng)絡(luò)，例如檢測 ERK1/2 磷酸化水平變化；在病毒學(xué)研究中，作為多種逆轉(zhuǎn)錄病毒的易感細胞，可用于病毒培養(yǎng)、滴度測定及病毒復(fù)制機制研究；在基因編輯領(lǐng)域，因其轉(zhuǎn)染效率高，常作為 CRISPR/Cas9 技術(shù)的驗證模型，評估基因敲除或敲入的效果。
此外，該細胞系在細胞生物學(xué)基礎(chǔ)研究中也不ke或缺。其接觸抑制特性被用于探究細胞周期調(diào)控機制，通過檢測不同生長階段的周期蛋白（如 Cyclin D1）表達，闡明細胞增殖的分子開關(guān)；在細胞遷移研究中，劃痕實驗顯示 NIH/3T3 細胞具有活躍的運動能力，可通過分析遷移距離評估細胞的遷移潛能及相關(guān)調(diào)控因子的作用。
隨著細胞共培養(yǎng)技術(shù)的發(fā)展，NIH/3T3 細胞常作為飼養(yǎng)層細胞支持干細胞的生長與分化，例如在胚胎干細胞培養(yǎng)中，其分泌的細胞因子能維持干細胞的未分化狀態(tài)，為干細胞研究提供重要支撐。
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