EL4小鼠淋巴瘤細胞系
EL4小鼠淋巴瘤細胞系是研究 T 淋巴細胞惡性轉(zhuǎn)化及免疫功能調(diào)控的經(jīng)典模型，以 T 細胞表型典型性、對絲裂原的高反應性及腫瘤發(fā)生模擬性為核心優(yōu)勢，在 T 細胞信號傳導、淋巴瘤發(fā)病機制及免疫調(diào)節(jié)研究中應用廣泛，為解析 T 細胞淋巴瘤的病理特征提供了可靠實驗載體。
來源與背景：該細胞系源自 1950 年代建立的 C57BL/6 小鼠自發(fā)性胸腺淋巴瘤，是首ge被證實具有成熟 T 細胞表型的淋巴瘤細胞系。臨床 T 細胞淋巴瘤約占非霍奇金淋巴瘤的 15%，而 EL4 細胞系接種同源小鼠后可形成胸腺淋巴瘤，與人類 T 細胞淋巴瘤的病理進展高度相似。其建立填bu了 T 細胞淋巴瘤體外研究模型的空白，至今仍是 T 細胞生物學及淋巴瘤發(fā)生機制研究的基準細胞系，全球相關研究文獻超 4000 篇。
細胞特性：形態(tài)上呈圓形或橢圓形，直徑約 10-12μm，以懸浮生長為主，部分細胞輕微貼壁，呈單個或松散簇狀分布，細胞質(zhì)豐富，含少量嗜天青顆粒，細胞核大而圓，核質(zhì)比約 1:2，8% 細胞可見核分裂相，體現(xiàn) T 淋巴瘤細胞的惡性特征。核心特性突出：T 細胞表型典型，表達 CD3、CD4、CD8 等 T 細胞表面標志物，其中 CD4?CD8?雙陽性表型與胸腺皮質(zhì) T 細胞特性一致；絲裂原反應敏感，刀豆蛋白 A（ConA）刺激后 24 小時內(nèi) IL-2 分泌量達 350pg/ml，細胞增殖速率提升 2.3 倍，wan美模擬 T 細胞活化過程；成瘤能力穩(wěn)定，皮下接種 C57BL/6 小鼠成瘤率 100%，3 周內(nèi)形成直徑 1.2cm 的淋巴瘤，腫瘤組織病理形態(tài)與人類外周 T 細胞淋巴瘤相似。傳代時無需消化處理，直接收集細胞懸液按 1:5 比例稀釋接種，細胞密度維持在 2×10?-1×10?個 /ml，過高會導致細胞活力下降 25%。
培養(yǎng)條件：基礎培養(yǎng)采用含 10% 胎牛血清的 RPMI-1640 培養(yǎng)基，添加 1% 雙抗，37℃、5% CO?飽和濕度環(huán)境。關鍵培養(yǎng)要點：血清質(zhì)量要求，需使用低內(nèi)毒素血清（<0.1EU/ml），否則會非特異性激活 T 細胞信號通路，導致 IL-2 基礎分泌量升高 3 倍；活化狀態(tài)調(diào)控，實驗需區(qū)分靜息與活化狀態(tài)時的細胞特性，ConA 刺激需控制濃度（最佳濃度 2μg/ml），超過 5μg/ml 會誘導細胞凋亡；污染防控，因懸浮生長特性，需每周檢測支原體，污染后采用專用清除試劑處理，恢復率可達 90%。凍存采用含 10% DMSO 和 20% 胎牛血清的凍存液，程序降溫后液氮保存，復蘇后 48 小時存活率達 90%，T 細胞表型不變。
檢測鑒定：微生物檢測無細菌、真菌及支原體污染，符合實驗細胞標準。流式細胞術分析顯示 CD3?、CD4?、CD8?、TCRαβ?，證實成熟 T 細胞表型；細胞因子檢測證實 ConA 刺激后 IL-2、IFN-γ 分泌量顯著升高，驗證 T 細胞活化功能。功能驗證中，ConA 處理后細胞周期分析顯示 S 期比例從 15% 升至 45%，Western blot 證實 ERK1/2 和 NF-κB 通路磷酸化水平升高 5 倍，證實 T 細胞活化信號通路完整。染色體核型為近二倍體（眾數(shù) 40-42），存在 6 號染色體長臂缺失（含 T 細胞受體調(diào)控區(qū)域），與臨床 T 細胞淋巴瘤遺傳學改變部分吻合。
應用領域：在 T 細胞活化機制研究中，通過該細胞系發(fā)現(xiàn)鈣調(diào)磷酸酶 - NFAT 通路是 IL-2 表達的關鍵調(diào)控軸，環(huán)bao素 A 可抑制 NFAT 核轉(zhuǎn)位，使 IL-2 分泌量下降 80%，為免疫抑制劑的作用機制提供直接證據(jù)。在淋巴瘤發(fā)病研究中，利用其建立的移植瘤模型，發(fā)現(xiàn) Notch1 基因突變可促進細胞惡性增殖，沉默 Notch1 后腫瘤體積縮小 60%，揭示 T 細胞淋巴瘤的驅(qū)動機制。在免疫調(diào)節(jié)研究中，作為 T 細胞 - APC 相互作用模型，發(fā)現(xiàn)樹突狀細胞分泌的 IL-12 可增強 EL4 細胞的 IFN-γ 分泌能力 3.5 倍，闡明抗原提呈細胞對 T 細胞功能的調(diào)控作用。此外，該細胞系可用于腫瘤免疫逃逸研究，發(fā)現(xiàn)其高表達 PD-L1（約 40% 陽性率），阻斷 PD-1/PD-L1 相互作用可增強 T 細胞對 EL4 細胞的殺傷活性 2.8 倍。
與其他 T 細胞淋巴瘤模型相比，EL4 細胞系的優(yōu)勢在于其 T 細胞表型的典型性、活化信號通路的完整性及同源小鼠模型的成瘤穩(wěn)定性，絲裂原反應靈敏度遠超 Jurkat 細胞（約 2 倍）。通過該細胞系的研究，已闡明 18 個 T 細胞活化相關基因，推動 4 種 T 細胞淋巴瘤靶向藥物進入臨床前試驗，為 T 細胞生物學及淋巴瘤研究提供了重要實驗依據(jù)。
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