Hep-3B人肝癌細胞系
Hep-3B人肝癌細胞系源于人體肝細胞癌組織，作為肝癌研究領域的經典模型，在探索腫瘤奧秘與開發抗癌策略中扮演關鍵角色。光學顯微鏡下，Hep-3B 細胞呈現多邊形或不規則形態，緊密貼附于培養瓶底部，常聚集成多層細胞簇，形似 “微型腫瘤"。細胞胞質豐富，經 HE 染色后呈強嗜酸性，內含大量異常增殖的線粒體，其數量較正常肝細胞高出 3 倍，為癌細胞feng狂增殖提供充足能量；內質網擴張變形，參與合成大量促癌蛋白。細胞核大而畸形，核質比高達 0.7（正常肝細胞約 0.4），核仁數目增多至 2 - 3 個，部分細胞出現雙核、多核現象，異常核分裂象頻率達 15%，遠超正常細胞水平。
Hep-3B 細胞的生物學特性ji具研究價值。增殖調控方面，其細胞周期關鍵蛋白 Cyclin D1 表達量較正常肝細胞上調 4.2 倍，持續激活 CDK4/6 激酶，推動細胞周期從 G1 期向 S 期異常進展，細胞倍增時間僅 24 - 36 小時。信號通路層面，Wnt/β-catenin 通路異常激活，β-catenin 蛋白在細胞質中累積量增加 2.8 倍，入核后激活 MYC、CCND1 等下游基因轉錄；PI3K/AKT 通路的激活使 AKT 磷酸化水平提升 3.5 倍，通過抑制 Bad、激活 mTORC1，顯著增強細胞存活與代謝能力。侵襲轉移特性上，Hep-3B 細胞分泌的 MMP-2、MMP-9 酶活性分別是正常肝細胞的 6 倍和 8 倍，可快速降解細胞外基質成分；細胞表面整合素 αvβ3 表達量上調 5 倍，增強細胞與基底膜的黏附 - 脫離能力，加速癌細胞遷移。此外，研究發現 Hep-3B 細胞對索拉非尼的耐藥指數達 3.2，為解析肝癌耐藥機制提供理想模型。
培養 Hep-3B 細胞需精準把控關鍵環節。采用含 10% 特級胎牛血清的高糖 DMEM 培養基，配合 1% 雙抗（青mei素 - 鏈mei素），在 37℃、5% CO?培養箱中維持優良生長狀態。當細胞匯合度達 85% 時，用 0.25% 胰dan白酶 - EDTA 溶液消化，嚴格控制消化時間在 2 - 3 分鐘，傳代比例 1:3 - 1:4。凍存時使用 90% 胎牛血清與 10% DMSO 凍存液，經程序降溫后置于液氮保存。培養過程中，每周需檢測細胞活力（臺盼藍染色）、形態學特征及標志物表達（AFP、PCNA），確保細胞特性穩定。
在科研應用領域，Hep-3B 細胞系成果斐然。2023 年一項研究通過 CRISPR 技術敲除 Hep-3B 細胞的 TP53 基因，發現其 Wnt/β-catenin 通路活性進一步增強，癌細胞干性提升 40%，揭示 TP53 缺失與 Wnt 通路激活的協同促癌機制。藥物研發方面，新型 MEK 抑制劑 U0126 在 Hep-3B 細胞實驗中，可顯著抑制 ERK 磷酸化，使細胞增殖抑制率達 78%，誘導細胞凋亡率提升至 35%。針對耐藥問題，聯合使用索拉非尼與 PI3K 抑制劑 LY294002，可使 Hep-3B 細胞耐藥性降低 60%，為臨床聯合用藥提供理論依據。此外，基于 Hep-3B 細胞構建的 3D 腫瘤球模型，已成功用于評估納米載藥系統對肝癌的靶向治療效果，推動肝癌精準醫療的發展。
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