目錄:上海乾思生物科技有限公司>>細胞>>細胞系>> BY-1403MM-K3獼猴腎細胞系
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來源與建立背景
形態與生長特征
功能特性
病毒受體表達：細胞膜表面高表達多種病毒受體，如猴免疫缺陷病毒（SIV）的受體 CD4 與共受體 CCR5，人巨細胞病毒（HCMV）的受體 PDGFRα，表達量均顯著高于常用的非洲綠猴腎細胞（如 Vero），為多種病毒感染提供分子基礎。
病毒敏感性：對乙型腦炎病毒、脊髓灰質炎病毒、輪狀病毒等具有廣譜敏感性，感染效率達 85%-95%，病毒滴度可達 10?-10? TCID??/mL；尤其對靈長類特異性病毒（如 SIV、猴痘病毒）的支持能力突出，滴度較其他猴源細胞高 1-2 個數量級，是研究人畜共患病病毒的理想模型。
代謝特性：具有活躍的葡萄糖轉運與氨基酸代謝能力，乳酸脫氫酶活性較低（＜200U/L），適合長時間病毒培養，可延長病毒復制平臺期至 72-96 小時。
人畜共患病毒分離與鑒定
臨床樣本檢測：可用于從疑似感染樣本中分離病毒，如乙型腦炎患者腦脊液樣本接種后，48 小時即可觀察到典型細胞病變（胞質內顆粒增多、細胞融合），分離效率達 90%，較傳統細胞系縮短 12-24 小時，為疫情快速診斷提供技術支持。
病毒分型研究：通過觀察不同病毒株在 MM-K3 細胞中的增殖差異，可區分病毒亞型。例如，脊髓灰質炎病毒 Ⅰ 型在該細胞中滴度比 Ⅱ 型高 10 倍，且蝕斑形態更大，為病毒分型提供直觀依據。
疫苗研發與生產
減毒疫苗株篩選：因對病毒的敏感性與復制支持能力均衡，可用于篩選安全有效的減毒疫苗株。例如，在 MM-K3 細胞中連續傳代乙型腦炎病毒，獲得的減毒株在猴體實驗中神經毒力降低 90%，且保留良好的免疫原性（中和抗體效價達 1:512），為疫苗開發提供候選株。
滅活疫苗生產工藝優化：在微載體培養系統中，MM-K3 細胞密度可達 5×10? cells/cm2，輪狀病毒滴度穩定在 10? TCID??/mL，單批次疫苗產量較轉瓶培養提升 8 倍，且疫苗抗原純度更高（雜蛋白含量＜0.1%），符合獸用疫苗生產標準。
病毒跨物種感染機制研究
宿主適應性突變分析：利用 MM-K3 細胞模擬獼猴宿主環境，研究病毒從動物向人傳播的分子機制。例如，通過 SIV 在該細胞與人類 T 細胞中的傳代實驗，鑒定出 env 基因的 3 個氨基酸突變（V3 環區域），這些突變使病毒獲得識別人類 CCR5 的能力，揭示了跨物種傳播的關鍵突變事件。
抗病毒天然免疫研究：該細胞系保留完整的固有免疫通路，可用于研究宿主抗病毒天然免疫應答。例如，敲除 MM-K3 細胞的 TLR7 基因后，寨卡病毒復制效率提升 3 倍，證實 TLR7 介導的 Ⅰ 型干擾素應答在抗病毒中的關鍵作用，為開發免疫調節藥物提供靶點。
基礎培養方案
培養基：MEM 培養基添加 10% 胎牛血清、1% 谷an酰胺，pH 維持在 7.2-7.4，可加入適量抗生素預防污染（青mei素 - 鏈mei素終濃度 100U/mL）。
傳代流程：當細胞融合度達 70%-80% 時，棄去舊培養基，PBS 洗滌 2 次，加入 0.25% yi酶溶液，37℃孵育 4-5 分鐘至細胞脫落，加入含血清的培養基終止消化，按 1:4 比例接種至新培養瓶，避免消化過度影響細胞活性。
凍存保護：取對數生長期細胞，用含 10% DMSO 的wan全培養基重懸至密度 8×10?個 /mL，分裝后經程序降溫盒 - 80℃過夜，轉移至液氮長期保存，復蘇時 37℃水浴快速解凍，離心去除 DMSO 后接種，傳代 2 次待細胞狀態穩定后使用。
病毒培養與檢測
病毒接種：細胞以 1×10?個 / 孔接種 24 孔板，培養 24 小時至融合度 60%，用無血清培養基稀釋病毒（MOI=0.1），37℃吸附 1.5 小時，換含 2% 血清的維持液，每日觀察細胞病變，72 小時后通過 TCID??法測定病毒滴度。
病毒鑒定：通過間接免疫熒光檢測病毒抗原（如乙型腦炎病毒 E 蛋白），或提取病毒 RNA 進行 RT-PCR 鑒定，確保分離病毒的特異性。
優勢：
靈長類模型優勢：作為獼猴源細胞，其生理特性與人類更接近，研究結果對人類疾病的參考價值高于其他動物源細胞，尤其適合人畜共患病研究。
病毒廣譜敏感性：對多種病毒均有良好支持能力，可減少實驗中細胞系的更換，提高研究效率。
培養穩定性：生長特性穩定，傳代操作簡便，適合標準化實驗流程，批間差異＜10%。
局限性：
倫理與成本限制：獼猴屬于保護動物，細胞系來源受倫理規范約束，獲取成本較高，限制了大規模應用。
部分病毒敏感性不足：對甲型流感病毒等呼吸道病毒的支持能力較弱，滴度較低（＜10? TCID??/mL），需結合其他細胞系使用。
物種特異性差異：雖然接近人類，但仍存在物種特異性分子差異（如部分細胞因子序列），研究結果需在人源細胞中驗證。
MM-K3 獼猴腎細胞系的建立為靈長類病毒研究提供了重要工具，其在人畜共患病病毒分離與機制研究中的應用，加深了對病毒跨物種傳播規律的理解，為傳染病防控策略制定提供了科學依據。在疫苗研發領域，其高效的病毒支持能力加速了多種獸用疫苗的開發，降低了動物疫病的危害。未來，通過基因編輯技術引入人源化受體（如 ACE2），可進一步提升其對人類病毒的敏感性；結合類器官培養技術，有望構建 “腎臟類器官模型"，更真實模擬病毒在體內的感染過程，推動病毒學研究與疫苗開發的發展。
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