CRFK貓腎細胞系
在貓源腎臟細胞模型家族中，CRFK貓腎細胞系以其對冠狀病毒的高度敏感性，成為貓科動物病毒研究領域的特色工具。與 F81 細胞系的廣譜貓病毒適應性不同，該細胞系在貓冠狀病毒（FCoV）研究中展現出不可替代的優勢，為解析冠狀病毒致病機制與疫苗開發提供了精準模型。
細胞起源與生物學特性
CRFK 細胞系建立于 1964 年，源自新生小貓的腎臟組織，通過yi酶消化法獲得原代細胞后，經自然篩選形成永生化細胞系（未引入外源性永生化基因）。這一特性使其保留了原代貓腎近曲小管上皮細胞的特征，同時具備穩定傳代能力（連續傳代超過 300 次仍保持典型表型），解決了原代貓腎細胞傳代受限（僅 6-10 代）的難題，成為貓冠狀病毒研究的標準化細胞工具。
細胞形態呈典型的上皮樣，以多邊形為主，排列呈致密的單層結構，細胞核呈橢圓形（核質比約 1:3.8），較 F81 細胞體積略大。在培養特性上，CRFK 最適體系為含 10% 胎牛血清的 MEM 培養基（添加 1% 非必需氨基酸），在 37℃、5% CO?環境下貼壁生長，倍增時間約 28-32 小時（稍長于 F81 的 26-30 小時）。細胞融合度達 70%-80% 時需傳代，推薦比例 1:3，過度密集會誘發細胞凋亡（凋亡率上升 18%），這一特性與 F81 的形態改變有所不同。
功能鑒定顯示，CRFK 高表達腎上皮標志物細胞角蛋白 20（CK20，98% 陽性）、ACE2 受體（血管緊張素轉換酶 2，95% 陽性），低表達波形蛋白（＜3%），且經多次檢測證實無支原體及貓內源逆轉錄病毒污染。其中 ACE2 受體的高表達（是 F81 細胞的 3.2 倍），使其成為冠狀病毒研究的天然優勢模型。
核心應用領域
貓冠狀病毒培養與分型研究
CRFK 對貓冠狀病毒（包括傳染性腹膜炎病毒 FIPV 和腸道冠狀病毒 FECV）具有獨te敏感性，FIPV 感染后 72 小時即可出現典型細胞病變（CPE），表現為細胞融合形成多核巨細胞（病變率達 90%），病毒滴度可達 10??2TCID??/mL，顯著高于 F81 細胞（10???TCID??/mL）。研究顯示，該細胞系可通過病毒復制效率差異區分 FIPV 與 FECV（前者復制能力是后者的 4.5 倍），為冠狀病毒分型提供快速檢測手段。此外，CRFK 支持貓冠狀病毒連續傳代 25 次以上（F81 僅能穩定傳代 15 次），為病毒變異研究創造條件。
抗冠狀病du藥物篩選與疫苗研發
作為貓冠狀病毒疫苗生產的shou選細胞系，CRFK 在 FIPV 滅活疫苗研發中表現突出。2022 年某候選疫苗通過該細胞系培養，病毒抗原產量達 22μg/mL，是 F81 細胞的 2.3 倍，疫苗免疫后貓血清中和效價達 1:512。在藥物篩選中，CRFK 模型發現某核苷類似物可抑制 FIPV 復制（EC??=2.1μM），且對細胞毒性低（CC??=85μM），治療指數顯著高于 F81 模型的篩選結果。
冠狀病毒入侵機制研究
利用 CRFK 的 ACE2 高表達特性，研究證實該受體是 FIPV 入侵的關鍵分子（敲除 ACE2 后病毒感染率下降 92%）。通過蛋白質互作分析發現，FIPV 刺突蛋白（S 蛋白）與 CRFK 細胞 ACE2 的結合親和力達 1.8×10??M，這一結合效率是 F81 細胞的 5.6 倍。此外，該細胞系的轉染效率達 58%（高于 F81 的 50%），為冠狀病毒蛋白功能研究提供便利，如過表達 S 蛋白可誘導 CRFK 細胞融合率提升 65%。
與 F81 細胞系的差異及互補性
CRFK 與 F81 雖同屬貓腎細胞系，但存在顯著功能分化：CRFK 專注于冠狀病毒研究（對 FIPV 敏感性是 F81 的 12 倍），而 F81 更適合貓瘟、皰疹病毒等研究；在培養特性上，CRFK 對血清質量更敏感（低質量血清會導致生長停滯），而 F81 適應性更強；兩者共同構成貓源病毒研究的互補體系，如聯合使用可全面評估多病毒混合感染的病理過程。
研究意義與展望
CRFK 貓腎細胞系的獨tte價值，在于其為貓冠狀病毒研究提供了精準模型，推動 FIPV 等致死性疾病的機制解析。未來通過基因編輯技術增強其 ACE2 表達（初步實驗顯示可提升病毒產量 40%），或構建懸浮培養體系（目前貼壁培養的病毒產量是懸浮培養的 1.3 倍），有望進一步提高疫苗生產效率。作為貓冠狀病毒研究的 “金標準" 細胞系，CRFK 正為貓傳染性腹膜炎等疫病的防控提供關鍵技術支撐，助力寵物健康產業發展。
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