來源與克隆背景：該細(xì)胞系源自 1962 年分離的非洲綠猴腎原代細(xì)胞，1976 年通過有限稀釋法獲得單克隆衍生株（“76" 代表克隆年份）。篩選過程基于病毒敏感性與生長均一性指標(biāo)，未引入外源基因，全基因組測序顯示其染色體數(shù)目為 60（近二倍體），與 Vero 親本細(xì)胞遺傳相似度＞98%，核型穩(wěn)定性在傳代 100 次內(nèi)畸變率＜3%，群體均一性優(yōu)于早期 Vero 混合株（流式檢測細(xì)胞周期同步率提升 25%）。

形態(tài)與增殖：體外培養(yǎng)呈典型上皮樣形態(tài)，貼壁生長時(shí)呈多邊形，胞質(zhì)致密，細(xì)胞排列規(guī)則呈單層；懸浮培養(yǎng)易脫落死亡，故以貼壁培養(yǎng)為主。37℃、5% CO?條件下，增殖周期約 30-34 小時(shí)，適應(yīng)含 10% 胎牛血清的 MEM 培養(yǎng)基，傳代 80 次以上生長速率衰減＜12%，凍存復(fù)蘇后存活率超 85%，可在無血清培養(yǎng)基中馴化（6-8 周適應(yīng)期），細(xì)胞密度可達(dá) 4×10?個(gè) /cm2。

功能特征：核心優(yōu)勢在于病毒親和性與復(fù)制支持能力：狂犬病毒糖蛋白受體（如 nAChR）表達(dá)量較普通 Vero 細(xì)胞高 2 倍（免疫熒光檢測），感染后 72 小時(shí)病毒滴度可達(dá) 10?-10? FFU/mL；對單純皰疹病毒（HSV）的敏感性表現(xiàn)為快速出現(xiàn)細(xì)胞病變（CPE），48 小時(shí)內(nèi)病變率達(dá) 90%，顯著短于其他猴腎細(xì)胞系。同時(shí)，其缺乏干擾素合成能力（IFN-β 分泌量＜0.5pg/mL），可避免病毒復(fù)制被宿主免疫機(jī)制抑制，保障高滴度病毒產(chǎn)出。

貼壁培養(yǎng)操作：

病毒培養(yǎng)流程：

凍存流程：取對數(shù)生長期細(xì)胞，1000rpm 離心 5 分鐘，凍存液（70% MEM+20% 胎牛血清 + 10% DMSO）重懸至 6×10?個(gè) /mL，分裝凍存管，程序降溫盒 - 80℃過夜后移至液氮，保存期超 5 年，復(fù)蘇后傳代 2 次再用于病毒實(shí)驗(yàn)（確保受體表達(dá)穩(wěn)定）。

優(yōu)勢：對狂犬病毒、皰疹病毒敏感性ji高（滴度較普通 Vero 細(xì)胞高 1-2 個(gè)數(shù)量級）；遺傳背景穩(wěn)定，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好（CV＜7%）；符合 GMP 標(biāo)準(zhǔn)，無內(nèi)源性病毒污染；可適應(yīng)無血清培養(yǎng)，便于工業(yè)化生產(chǎn)；病毒復(fù)制周期短，實(shí)驗(yàn)效率高。

局限性：對非包膜病毒（如腺病毒）敏感性較低；長期傳代（＞100 次）可能出現(xiàn)病毒受體表達(dá)下調(diào)（約 10%）；貼壁依賴性強(qiáng)，懸浮培養(yǎng)難度高于 CHO 細(xì)胞；缺乏干擾素系統(tǒng)，可能影響藥物體內(nèi)外活性相關(guān)性。