U14小鼠子宮頸癌瘤株細胞系
U14小鼠子宮頸癌瘤株細胞系源自 615 近交系小鼠的自發性子宮頸癌組織，是保留宮頸鱗狀上皮惡性轉化特征和宮頸間質浸潤能力的經典腫瘤模型，在宮頸癌發生發展機制、宮頸組織特異性侵襲及抗腫瘤藥物篩選研究中具有重要價值，為解析宮頸鱗癌的生物學行為提供了理想工具。
該細胞系呈現典型的宮頸癌細胞形態與表型特征。顯微鏡下，細胞呈多邊形或梭形，貼壁生長時排列呈不規則片狀或巢狀，部分區域可見角化珠樣結構，模擬宮頸鱗狀上皮的分化特征。細胞核呈圓形或不規則形，核質比高，染色質呈粗顆粒狀，可見 2-3 個明顯核仁，核分裂象多見（每 10 個高倍視野 8-10 個），胞質較少，呈嗜堿性，部分細胞胞質內可見角質顆粒，電鏡下可見細胞間橋粒連接減少，張力原纖維排列紊亂，符合鱗狀上皮源性腫瘤的超微結構特點。免疫表型分析顯示，細胞高表達宮頸鱗狀上皮特異性標志物細胞角蛋白 17（CK17）和 p16INK4a，流式細胞術檢測陽性率分別達 92% 和 88%，同時表達宮頸癌相關抗原 SCC-Ag，陽性率達 80%，而腺上皮標志物 CK7 表達陰性，證實其宮頸鱗狀上皮來源特性。
體外培養體系中，U14 細胞展現出穩定的增殖能力與強侵襲潛能。最適培養條件為含 10% 胎牛血清的 RPMI 1640 培養基，添加 1% 谷an酰胺，在 37℃、5% CO?環境下，傳代周期約 60 小時，對數生長期細胞活力達 90% 以上，倍增時間約 40 小時。其顯著特點是對宮頸間質的侵襲能力突出，Transwell 侵襲實驗中，以鼠宮頸間質基質為屏障時，24 小時穿透細胞數是乳腺癌細胞系 MCF-7 的 1.6 倍，這種組織特異性侵襲與細胞高表達基質金屬蛋白酶 - 9（MMP-9）密切相關，酶譜分析顯示其活性較正常宮頸上皮細胞高 5 倍，可高效降解宮頸間質的膠原蛋白成分。軟瓊脂克隆形成率達 35%，克隆形態呈不規則團塊狀，邊緣有偽足樣突起，反映其侵襲性生長特征。凍存復蘇性能良好，液氮凍存后復蘇存活率超 85%，連續傳代 50 次后，SCC-Ag 表達及侵襲能力無明顯衰減，保證實驗的穩定性與可重復性。
U14 細胞的核心價值體現在其對宮頸癌浸潤過程的精準模擬。在動物模型中，將 1×10?個細胞接種于 615 小鼠宮頸黏膜下層，12 天形成原發瘤，20 天腫瘤穿透基底膜，28 天浸潤至宮頸肌層，成瘤率 100%，病理切片顯示腫瘤組織保留 CK17 表達，呈浸潤性生長，破壞宮頸腺體結構，與人類宮頸鱗癌的浸潤模式高度一致。通過熒光標記追蹤發現，腫瘤細胞首先破壞宮頸黏膜上皮完整性，沿宮頸腺體間隙侵襲，逐步穿透固有層和肌層，這一過程依賴細胞分泌的透明質酸酶，可降解宮頸間質中的透明質酸屏障，透明質酸酶抑制劑處理可使浸潤深度減少 55%。
在發病機制研究中，該細胞系揭示了宮頸癌te有的分子異常。基因測序顯示，細胞存在 HPV16 E6/E7 整合，導致 p53 蛋白降解增加和 Rb 蛋白功能失活，Western blot 檢測顯示 p53 表達量較正常宮頸上皮細胞低 60%，Rb 磷酸化水平高 3 倍，使細胞周期檢查點失控，S 期比例增加 30%。同時，細胞中 PI3K/Akt 信號通路異常激活，Akt 磷酸化水平高 4 倍，可促進抗凋亡蛋白 Bcl-2 表達，Akt 抑制劑處理可使細胞增殖率下降 50%，凋亡率上升 35%。與其他婦科腫瘤相比，其表皮生長因子受體（EGFR）表達更為顯著，蛋白水平高 3 倍，抑制 EGFR 可使細胞克隆形成率下降 65%，證實其在腫瘤增殖中的作用。
在轉移機制研究中，U14 細胞展現出以淋巴轉移為主的特性。動物實驗顯示，35 天盆腔淋巴結轉移率達 70%，腹腔種植轉移率為 45%，血行轉移較少見（肺轉移率 20%），這種轉移模式與細胞高表達 CC 趨化因子受體 7（CCR7）相關，該受體可與淋巴結中的 CCL21 結合，流式細胞術檢測顯示其與淋巴結內皮細胞的黏附率達 45%，CCR7 抗體處理可使淋巴結轉移率下降 60%。基因芯片分析顯示，轉移灶細胞中與上皮間質轉化相關的 Twist 和 Snail 表達上調，E - 鈣粘蛋白表達下降 50%，使細胞獲得遷移能力，沉默 Twist 后，細胞遷移率下降 55%。
在藥物篩選應用中，U14 細胞是評估宮頸癌治療藥物的有效工具。體外藥敏實驗顯示，細胞對shun鉑敏感性較高，半數抑制濃度（IC50）約 1.5μM，聯合使用 EGFR 抑制劑后，IC50 降至 0.6μM，協同指數為 0.6，證實聯合用藥的增效作用。體內實驗中，該聯合方案可使 615 小鼠宮頸癌原發瘤體積縮小 75%，淋巴結轉移率從 70% 降至 20%，療效優于單藥治療。基于其 HPV 相關特性，還可用于 HPV 相關宮頸癌的靶向藥物研究，搭載 E6/E7 siRNA 的納米藥物對 U14 細胞的抑制率達 70%，顯著降低腫瘤組織中 E6/E7 的表達量。
在腫瘤微環境研究中，U14 細胞與宮頸成纖維細胞的相互作用為解析腫瘤進展提供了線索。共培養實驗顯示，成纖維細胞分泌的轉化生長因子 -β（TGF-β）可激活腫瘤細胞的 Smad 通路，使 MMP-9 表達上調 2.5 倍，侵襲能力增強 65%，TGF-β 中和抗體可阻斷這種促進作用。在缺氧微環境（1% O?）中，細胞 HIF-1α 表達上調，誘導血管內皮生長因子（VEGF）分泌增加，促進腫瘤血管生成，VEGF 抗體處理可使腫瘤微血管密度減少 50%，為針對腫瘤微環境的治療提供實驗依據。
以上信息僅供參考，詳細信息請聯系我們。
13
化工儀器網