目錄:上海乾思生物科技有限公司>>細胞>>細胞系>> BY-1434PK15-IL2表達IL2的豬腎上皮細胞系
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來源與建立背景
形態與生長特征
功能特性
懸浮適應性特征:高表達懸浮生長相關基因,如細胞骨架蛋白 β-actin(表達量是貼壁 PK15 細胞的 1.5 倍),細胞間黏附分子表達下降 60%,避免聚團過大導致的營養不均;同時代謝效率顯著提升,葡萄糖消耗速率達 50mg/L/h,乳酸代謝能力是 ZYM-DIEC02 細胞的 3 倍,可維持高密度培養環境的穩態。
病毒受體與敏感性:保留豬腎細胞的病毒受體譜,如豬瘟病毒受體 CD46(陽性率 92%)、口蹄疫病毒受體整合素 β1(陽性率 88%),其受體表達量與貼壁 PK15 細胞相當;對豬瘟病毒、口蹄疫病毒的感染效率達 95%,豬瘟病毒滴度達 10?.? TCID??/mL(與 ZYM-DIEC02 細胞相當,但產量因密度優勢提升 10 倍)。
無血清適應能力:可在化學成分明確的無血清培養基中穩定生長,擺脫對胎牛血清的依賴,外源蛋白污染風險降低 90%,且細胞活性保持 90% 以上,為疫苗純化提供便利。
疫苗工業化生產
大規模病毒增殖:在 500L 生物反應器中,PK16-U 細胞密度可達 8×10?個 /mL,豬瘟病毒產量達 8×101? TCID??(是 10 層細胞工廠的 20 倍),單位體積生產成本降低 60%;口蹄疫疫苗生產中,病毒滴度達 10?.2 PFU/mL,疫苗效力與傳統工藝相當,但生產周期縮短 50%,我國主流疫苗企業已廣泛采用該細胞系。
生產工藝優化:基于其懸浮特性,開發連續灌流培養工藝,實現細胞密度維持在 1×10?個 /mL 以上,病毒收獲周期從批次培養的 72 小時延長至 14 天,總病毒產量提升 3 倍,且產品質量波動系數<5%(優于貼壁培養的 15%)。
病毒學研究規模化開展
高通量病毒分離:利用 96 孔板懸浮培養體系,單次可處理 1000 份臨床樣本,豬瘟病毒分離效率達 90%(與 ZYM-DIEC02 細胞相當),但操作效率提升 8 倍,適合疫病暴發時的大規模篩查。
病毒復制機制研究:通過懸浮培養的同步化優勢,精準分析豬瘟病毒在不同增殖階段的基因表達譜,發現病毒非結構蛋白 NS5A 在懸浮細胞中表達量提升 40%,揭示懸浮環境對病毒復制的調控機制。
藥物篩選與安全性評價
抗病du藥物高通量篩選:建立基于懸浮細胞的自動化篩選平臺,日均可檢測 5000 種化合物,某抗豬瘟病毒候選藥物的 EC??值在該模型中與動物實驗一致性達 92%,篩選效率是 ZYM-DIEC02 細胞的 10 倍。
疫苗安全性評估:利用其高密度培養特性,快速積累細胞代謝產物,評估疫苗潛在毒性,某批次疫苗的內毒素檢測時間從傳統方法的 48 小時縮短至 6 小時,且靈敏度提升 10 倍。
基礎培養方案
培養基:無血清懸浮培養基(含重組胰島素、轉鐵蛋白),pH 維持在 7.2-7.4;為提升病毒產量,可添加 5ng/mL 生長激素,使細胞密度提升 20%。
傳代流程:當細胞密度達 8×10?個 /mL 時,按 1:5 比例稀釋傳代,離心速度 1200rpm,無需消化處理,操作時間僅為貼壁細胞的 1/5,避免酶解對細胞的損傷。
凍存保護:采用含 10% DMSO 的無血清凍存液,細胞密度 5×10?個 /mL,程序降溫至 - 80℃過夜后轉入液氮,復蘇時 37℃水浴 2 分鐘,直接接種至搖瓶,存活率可達 95%。
病毒培養與檢測操作
大規模病毒培養:生物反應器中細胞密度達 5×10?個 /mL 時,按 MOI=0.01 接種病毒,37℃培養 48 小時,通過離心收獲病毒液,病毒滴度較貼壁培養提升 30%,且收獲過程無需yi酶處理,減少雜蛋白污染。
高通量檢測:將懸浮細胞與病毒共孵育后,采用流式細胞術檢測感染率,1 小時內可完成 96 孔板檢測,結果變異系數<6%,顯著優于傳統顯微鏡觀察法。
優勢:
規模化培養優勢:懸浮培養密度是貼壁細胞的 10-20 倍,生物反應器可擴展至 1000L 以上,徹di突破傳統培養的空間限制,疫苗生產規模提升 100 倍以上。
成本顯著降低:無血清培養減少血清成本(占傳統培養基的 60%),自動化操作降低人力成本,且病毒單位產量成本下降 70%,使疫苗價格更親民。
操作高效便捷:無需yi酶消化、換液等貼壁操作,傳代時間縮短 80%,且可實現連續培養,適合工業化流水線生產。
局限性:
病毒譜局限:對腸道病毒(如 TGEV)的敏感性僅為 ZYM-DIEC02 細胞的 30%,不適合腸道病毒疫苗生產。
聚團控制要求高:過度聚團(>200μm)會導致內部細胞死亡,需嚴格控制搖床轉速與接種密度,增加工藝復雜度。
功能研究受限:缺乏貼壁細胞的極性與屏障功能,不適合病毒感染機制的精細研究,需與 ZYM-DIEC02 等細胞系配合。
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