Ca761小鼠乳腺癌瘤株細胞系
Ca761小鼠乳腺癌瘤株細胞系源自 615 近交系小鼠的自發性乳腺癌組織，是具有高成瘤性和淋巴結轉移傾向的乳腺癌模型，在乳腺癌區域淋巴結轉移機制、腫瘤微環境互作及抗轉移藥物篩選中具有du特jia值，為解析乳腺癌局部侵襲與淋巴道播散規律提供了理想工具。
該細胞系呈現典型的惡性上皮細胞形態與表型特征。顯微鏡下，細胞呈多邊形或短梭形，貼壁生長為主，排列呈雜亂的片狀，細胞間連接松散，無極性，細胞大小差異明顯（直徑 12-22μm），核質比高，細胞核畸形顯著，可見多核及巨核現象，染色質粗密呈塊狀，核仁大而清晰（2-3 個），核分裂象多見（每 10 個高倍視野 8-12 個），胞質呈弱嗜堿性，含少量脂質空泡，電鏡下可見細胞表面微絨毛增多，橋粒連接減少，反映其上皮間質轉化的部分特征。免疫表型分析顯示，細胞高表達乳腺癌相關標志物，如細胞角蛋白 18（CK18）、粘蛋白 1（MUC1），流式細胞術檢測陽性率分別達 92% 和 88%，同時表達淋巴轉移相關分子 CCL21 和 CXCR4，其中 CXCR4 在細胞表面的表達量較正常乳腺上皮細胞高 6 倍，為其淋巴結轉移特性提供分子基礎。
體外培養體系中，Ca761 細胞展現出穩定的增殖能力與顯著的淋巴侵襲潛能。最適培養條件為含 10% 胎牛血清的 RPMI 1640 培養基，在 37℃、5% CO?環境下，傳代周期約 60 小時，對數生長期細胞活力達 90% 以上，倍增時間約 40 小時，增殖速率略低于 Ca759 細胞。其顯著特點是具有ji強的體外侵襲能力，Transwell 侵襲實驗中 24 小時穿透基質膠的細胞數是低轉移乳腺癌細胞系的 3 倍，且對淋巴內皮細胞的黏附率達 45%（普通乳腺癌細胞約 20%），這種高黏附特性與其高表達整合素 α4β7 密切相關，阻斷該整合素可使黏附率下降 60%。軟瓊脂克隆形成率達 30%，克隆形態呈致密團塊狀，邊緣有細長突起，提示其侵襲性生長特征。凍存復蘇性能良好，液氮凍存后復蘇存活率超 85%，連續傳代 45 次后，淋巴結轉移相關分子表達及侵襲能力無明顯衰減，保證實驗穩定性。
Ca761 細胞的核心價值體現在其對淋巴結轉移過程的精準模擬。在動物模型中，將 1×10?個細胞接種于 615 小鼠乳腺脂肪墊，14 天形成原發瘤，28 天同側腋窩淋巴結轉移率達 75%，35 天鎖骨上淋巴結轉移率達 50%，轉移灶病理顯示腫瘤細胞取代淋巴組織，形成與原發灶相似的結構，且保留 CK18 表達。通過熒光標記細胞追蹤發現，腫瘤細胞先侵襲乳腺間質，穿透毛細淋巴管壁（第 18-22 天），在淋巴管內形成癌栓，最終定植于淋巴結皮質竇，這一過程與人類乳腺癌淋巴轉移的 "侵襲 - 穿透 - 定植" 三階段模式高度一致，為研究淋巴道轉移的動態機制提供了可視化模型。
在淋巴結轉移機制研究中，該細胞系揭示了趨化因子軸的關鍵作用。細胞高分泌 CCL2，可招募淋巴結來源的成纖維細胞樣網狀細胞（FRCs），FRCs 分泌的 CCL19 進一步促進腫瘤細胞遷移，形成 "腫瘤細胞 - FRCs" 趨化循環，Transwell 共培養實驗顯示 FRCs 可使 Ca761 細胞遷移數增加 2.5 倍，而 CCL19 中和抗體可阻斷這種促進作用。基因沉默 CXCR4 后，細胞對淋巴內皮細胞的黏附率下降 55%，淋巴結轉移率降至 20%，證實 CXCR4-CXCL12 軸在淋巴定植中的核心作用，Western blot 顯示該軸激活后可上調 MMP-14 表達，促進淋巴管基底膜降解。
在腫瘤微環境研究中，Ca761 細胞與淋巴基質細胞的相互作用為解析轉移微環境形成提供了線索。與淋巴結巨噬細胞共培養時，可誘導巨噬細胞極化為 M2 型（CD206?比例達 65%），M2 型巨噬細胞分泌的 IL-10 可激活腫瘤細胞的 STAT3 通路，使抗凋亡蛋白 Bcl-2 表達上調，凋亡率下降 40%，而清除巨噬細胞可使裸鼠淋巴結轉移率下降 45%。在缺氧微環境中（1% O?），細胞 HIF-1α 表達上調，誘導 VEGFC 分泌增加，促進淋巴管生成，條件培養基可使淋巴內皮細胞管腔形成數增加 2 倍，VEGFC 抗體處理可抑制這一過程。
在藥物篩選應用中，該細胞系是評估抗淋巴轉移藥物的理想模型。體外藥敏實驗顯示，細胞對多xi他賽的 IC50 為 1.2μM，較 Ca759 細胞敏感（IC50 1.8μM），聯合 CXCR4 拮抗劑后，IC50 降至 0.5μM，且 Transwell 侵襲細胞數減少 70%。體內實驗中，多xi他賽聯合 CXCR4 拮抗劑可使 615 小鼠腋窩淋巴結轉移率從 75% 降至 30%，原發瘤抑瘤率達 58%，腫瘤組織中 MMP-14 活性下降 60%，證實靶向聯合hua療的協同抗轉移作用。某中藥提取物處理后，細胞 CCL2 分泌量減少 55%，淋巴結轉移灶數量下降 40%，顯示其調節趨化因子網絡的潛力。
在激素相關性研究中，Ca761 細胞表現出弱雌激素受體（ER）陽性（約 25%），孕激素受體（PR）陰性特征，雌激素處理可使細胞增殖率提升 20%，但遠低于 Ca759 細胞（30%），提示其激素依賴性較低，更適合研究非激素依賴型乳腺癌的轉移機制。ER 信號通路激活后，CXCR4 表達上調 1.8 倍，說明激素信號可能通過調控轉移相關分子影響淋巴轉移進程。
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