M5076小鼠卵巢網織細胞肉瘤細胞系
M5076小鼠卵巢網織細胞肉瘤細胞系源自 C57BL/6 小鼠的自發性卵巢網織細胞肉瘤，是一種具有高度惡性表型和強轉移能力的腫瘤細胞模型，因能模擬肉瘤的侵襲轉移過程，在肉瘤發病機制、轉移途徑解析及抗腫瘤藥物篩選研究中占據重要地位。
該細胞系呈現典型的網織細胞肉瘤形態與惡性特征。顯微鏡下，細胞呈圓形或不規則形，以懸浮生長為主，部分細胞呈梭形并貼壁生長，細胞大小不均，直徑約 10-20μm，核質比ji高，細胞核呈多形性，可見扭曲、分葉狀核，染色質粗糙呈塊狀，核仁明顯且數量多（3-5 個），核分裂象多見，部分出現異常分裂，胞質少而嗜堿性，含少量顆粒狀物質，電鏡下可見胞質內游離核糖體豐富，細胞表面有大量微絨毛，這些形態特征與人類網織細胞肉瘤的病理表現高度相似。免疫表型分析顯示，細胞高表達網織肉瘤相關標志物，如 CD45（白細胞共同抗原）、vimentin（波形蛋白），同時低表達上皮標志物 CK，證實其間葉組織來源特性，流式細胞術檢測顯示 CD45 陽性率達 90% 以上，vimentin 陽性率達 95%，這些表型特征為其作為肉瘤模型提供了重要依據。
體外培養體系中，M5076 細胞展現出旺盛的增殖能力與顯著的轉移潛能。最適培養條件為含 10% 胎牛血清的 RPMI 1640 培養基，在 37℃、5% CO?環境下，傳代周期約 48 小時，對數生長期細胞活力可達 95% 以上，倍增時間約 24 小時，較普通腫瘤細胞增殖速度更快。其顯著特點是具有ji強的克隆形成能力，軟瓊脂克隆形成率達 45%，遠高于其他肉瘤細胞系（通常＜30%），且克隆形態不規則，邊緣呈毛刺狀，反映其高度惡性的生物學行為。在侵襲轉移實驗中，Transwell 侵襲實驗顯示 24 小時內穿透基質膠的細胞數是低轉移潛能肉瘤細胞的 5 倍，劃痕愈合實驗 12 小時愈合率達 80%，這種高侵襲遷移能力與其高表達基質金屬蛋白酶（MMP-2、MMP-9）密切相關，酶活性檢測顯示其 MMP-9 活性較正常卵巢細胞高 10 倍以上。該細胞系對培養環境適應性強，在血清濃度降至 5% 時仍能保持 70% 的增殖活性，凍存復蘇性能優異，液氮凍存后復蘇存活率超過 90%，連續傳代 60 次后，惡性表型與轉移能力無明顯改變，保證了實驗的穩定性。
M5076 細胞的核心價值體現在其作為高轉移肉瘤模型的研究應用，可精準模擬肉瘤的轉移過程。在體內轉移模型中，將 1×10?個細胞尾靜脈接種于 C57BL/6 小鼠，7 天即可在肝臟檢測到轉移灶，14 天肺、脾臟轉移灶出現，21 天轉移率達 100%，其中肝臟轉移灶數量最多（平均 8-12 個 / 小鼠），這種器官特異性轉移模式與人類卵巢網織細胞肉瘤的臨床轉移特征一致，為研究轉移器官選擇性機制提供了理想模型。通過熒光標記的 M5076 細胞，可追蹤轉移的動態過程，發現其轉移步驟包括：循環腫瘤細胞存活、外滲、定植、增殖，其中外滲過程依賴于細胞與血管內皮細胞的黏附，抗體阻斷整合素 αvβ3 后，肝臟轉移灶數量減少 60%，證實整合素在轉移中的關鍵作用。
在肉瘤發病機制研究中，M5076 細胞攜帶的分子異常為探索致癌信號通路提供了線索。基因芯片分析顯示，細胞中 Ras/MAPK 信號通路持續激活，K-Ras 基因存在激活突變（G12D），導致 ERK1/2 磷酸化水平較正常細胞高 8 倍，使用 MEK 抑制劑處理后，細胞增殖率下降 50%，侵襲能力下降 60%，裸鼠移植瘤體積縮小 70%，證實 Ras/MAPK 通路在其惡性表型中的核心作用。此外，細胞中抑癌基因 p53 發生失活突變，功能實驗顯示其無法誘導 p21 表達，細胞對 DNA 損傷藥物的敏感性下降，凋亡率僅為正常細胞的 1/3，這種抑癌基因失活與原癌基因激活的協同作用，模擬了人類肉瘤的常見分子改變。
在抗腫瘤藥物篩選中，M5076 細胞是評估抗肉瘤藥物療效的重要工具。基于其高轉移特性，可建立轉移抑制藥物篩選模型，如某天然化合物處理后，Transwell 侵襲實驗中穿透細胞數減少 70%，裸鼠肝臟轉移灶數量下降 50%，且對原發灶生長無明顯影響，提示其特異性抗轉移作用。在hua療藥物敏感性實驗中，細胞對阿mei素、環lin酰胺等常用肉瘤hua療藥物的敏感性較低，IC50 分別為 2.5μM 和 15μM，而聯合使用 MEK 抑制劑可使阿mei素的 IC50 降至 0.8μM，證實靶向聯合hua療的增效作用，為臨床用藥方案提供實驗依據。
在腫瘤微環境研究中，M5076 細胞與基質細胞的相互作用為解析微環境對轉移的影響提供了平臺。與肝星狀細胞共培養時，可誘導肝星狀細胞分泌 IL-6，進而激活腫瘤細胞的 STAT3 信號通路，使 MMP-9 表達上調，侵襲能力增強，而 IL-6 中和抗體可阻斷這種促進作用，證實腫瘤 - 基質細胞交叉對話在轉移中的重要性。在免疫微環境研究中，發現 M5076 細胞可招募調節性 T 細胞（Treg），使腫瘤微環境中 Treg 比例升高 3 倍，抑制抗腫瘤免疫應答，使用 CTLA-4 抗體阻斷后，Treg 比例下降，腫瘤浸潤 CD8?T 細胞增加，移植瘤生長受抑，為免yi治療研究提供了實驗依據。
隨著基因編輯技術的應用，M5076 細胞系被改造為更精準的研究模型。通過 CRISPR/Cas9 技術修復 K-Ras 突變后，細胞增殖率下降 40%，轉移能力下降 50%，證實 K-Ras 突變的驅動作用；而導入螢火蟲熒光素酶基因后，可通過活體成像實時監測腫瘤生長與轉移，使實驗數據更直觀量化。這些基因工程化細胞系進一步拓展了其在肉瘤研究中的應用范圍，為開發新型靶向治療策略提供了關鍵工具。
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