P3/NSI/1-Ag4-1小鼠骨髓瘤細(xì)胞系
P3/NSI/1-Ag4-1小鼠骨髓瘤細(xì)胞系源自 BALB/c 小鼠的漿細(xì)胞瘤，是雜交瘤技術(shù)中構(gòu)建單克隆抗體的 “黃金搭檔"。作為次黃piao呤 - 鳥piao呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶缺陷型（HGPRT?）細(xì)胞，其因無法自主合成嘌呤核苷酸且不分泌抗體的特性，成為融合脾細(xì)胞的理想伴侶，為單克隆抗體制備奠定了關(guān)鍵基礎(chǔ)。
顯微鏡下，該細(xì)胞呈典型懸浮生長，形態(tài)以圓形和橢圓形為主，如同在培養(yǎng)基中自由漂浮的 “小液滴"。細(xì)胞直徑約 12-15 微米，略大于普通淋巴細(xì)胞；胞質(zhì)豐富，因富含核糖體而呈強(qiáng)嗜堿性，部分細(xì)胞可見空泡結(jié)構(gòu)；核大而圓，位于細(xì)胞中央，核質(zhì)比高達(dá) 1:1，染色質(zhì)疏松，核仁明顯且數(shù)量較多（2-4 個），彰顯出旺盛的增殖活性。細(xì)胞倍增時間約 24-36 小時，當(dāng)密度達(dá)到 2×10?-3×10?個 / 毫升時需傳代，傳代時無需yi酶消化，僅需輕柔吹打使細(xì)胞團(tuán)分散，按 1:4-1:6 的比例接種至新培養(yǎng)基，連續(xù)傳代 50 次以上仍能保持穩(wěn)定的生物學(xué)特性。
培養(yǎng) P3/NSI/1-Ag4-1 細(xì)胞的核心在于模擬漿細(xì)胞的生長微環(huán)境。基礎(chǔ)培養(yǎng)基shou選 RPMI 1640，其含有的谷an酰胺、丙酮酸可滿足細(xì)胞高速代謝需求；添加 10% 熱滅活胎牛血清（FBS）提供生長因子，血清中含有的白細(xì)胞介素 - 6（IL-6）等細(xì)胞因子，對維持骨髓瘤細(xì)胞的增殖至關(guān)重要。培養(yǎng)環(huán)境需嚴(yán)格控制在 37℃、5% CO?的恒溫培養(yǎng)箱中，pH 值穩(wěn)定在 7.2-7.4，通過培養(yǎng)基中的酚紅指示劑可直觀監(jiān)測酸堿變化。特別注意，該細(xì)胞對血清質(zhì)量極為敏感，劣質(zhì)血清會導(dǎo)致細(xì)胞聚集成團(tuán)、增殖停滯，因此每批血清需經(jīng)至少 3 代培養(yǎng)驗(yàn)證，確保細(xì)胞存活率≥90%。
作為雜交瘤技術(shù)的核心工具細(xì)胞，其 HGPRT?缺陷型是實(shí)現(xiàn)選擇性篩選的關(guān)鍵。在單克隆抗體制備中，將免疫小鼠的脾細(xì)胞與該骨髓瘤細(xì)胞融合后，混合體系中存在三種細(xì)胞：未融合的脾細(xì)胞（體外存活僅 3-5 天）、未融合的骨髓瘤細(xì)胞、融合后的雜交瘤細(xì)胞。通過 HAT 選擇培養(yǎng)基（含次黃piao呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶），可特異性淘汰未融合的骨髓瘤細(xì)胞 —— 因 HGPRT 缺陷，骨髓瘤細(xì)胞無法利用次黃piao呤合成嘌呤，而氨基蝶呤阻斷了從頭合成途徑，最終因核苷酸匱乏死亡；雜交瘤細(xì)胞則因獲得脾細(xì)胞的 HGPRT 基因，可在 HAT 培養(yǎng)基中存活并增殖，這一篩選機(jī)制使雜交瘤細(xì)胞的獲得效率提升 10-20 倍。
在單克隆抗體優(yōu)化研究中，該細(xì)胞系可用于探索融合效率的影響因素。例如，通過調(diào)整聚乙二醇（PEG）濃度（常用 50% PEG 1500）、融合時間（1-2 分鐘）及細(xì)胞比例（脾細(xì)胞：骨髓瘤細(xì)胞 = 5:1-10:1），可將融合率從 10??提升至 10?3，顯著提高陽性克隆的篩選效率。同時，其不分泌抗體的特性避免了雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生 “混合抗體"，確保單克隆抗體的均一性，這也是其優(yōu)于 SP2/0-Ag14 等其他骨髓瘤細(xì)胞系的核心優(yōu)勢。
在抗體藥物研發(fā)中，該細(xì)胞系構(gòu)建的雜交瘤可穩(wěn)定分泌特異性抗體，為單克隆抗體的人源化改造提供原始模板。例如，抗 PD-1 單克隆抗體的早期研發(fā)中，通過該細(xì)胞系與免疫小鼠脾細(xì)胞融合，獲得的雜交瘤細(xì)胞分泌的抗體可特異性結(jié)合 PD-1 蛋白，經(jīng)測序后進(jìn)行人源化改造，最終開發(fā)出用于腫瘤免yi治療的臨床藥物。此外，該細(xì)胞系可用于研究抗體的糖基化修飾，其分泌的抗體糖型與人類漿細(xì)胞存在一定相似性，為優(yōu)化抗體的效應(yīng)功能（如 ADCC、CDC）提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
在骨髓瘤病理機(jī)制研究中，該細(xì)胞系可模擬多發(fā)性骨髓瘤的部分病理特征。通過檢測細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子（如 IL-6、TNF-α）及基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs），可探索骨髓瘤細(xì)胞與骨髓微環(huán)境的相互作用。例如，該細(xì)胞與骨髓基質(zhì)細(xì)胞共培養(yǎng)時，IL-6 分泌量增加 2-3 倍，進(jìn)而促進(jìn)自身增殖，形成 “自分泌 - 旁分泌" 惡性循環(huán)，這一機(jī)制為開發(fā) IL-6 受體拮抗劑提供了直接證據(jù)。
前沿研究中，該細(xì)胞系的應(yīng)用持續(xù)拓展。在 CRISPR 基因編輯輔助下，通過敲除免疫球蛋白恒定區(qū)基因，可構(gòu)建 “空載體" 骨髓瘤細(xì)胞，使雜交瘤分泌的抗體僅含可變區(qū)，便于后續(xù)的人源化改造；在單細(xì)胞測序技術(shù)中，對其與脾細(xì)胞融合后的雜交瘤進(jìn)行單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組分析，可揭示抗體親和力成熟的分子機(jī)制，為篩選高親和力抗體提供新策略。
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