目錄:上海乾思生物科技有限公司>>細胞>>細胞系>> BY-1386B95-8絨猴EBV轉化的白細胞系
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來源與轉化機制
形態與生長特征
遺傳與功能特性
染色體核型：保留絨猴二倍體核型特征（2n=46），長期傳代后異倍體比例＜15%，核型穩定性優于人類 EBV 轉化的 B 細胞系。
EBV 相關標志物：持續表達 EBV 潛伏抗原（EBNA1、LMP1）與早期抗原（EA），晚期抗原（VCA）表達率約 30%-40%（免疫熒光檢測），可自發釋放傳染性 EBV 顆粒（滴度 10?-10? PFU/mL）。
受體表達：高表達 EBV 主要受體 CD21（陽性率＞90%）及 B 細胞表面標志物 CD19、CD20，支持 EBV 再次感染與復制。
EBV 生物學研究
病毒復制周期解析：B95-8 可通過丁酸鈉或巴佛洛霉素 A1 誘導，使 EBV 從潛伏狀態進入裂解期，實現病毒全生命周期的體外模擬。例如，通過誘導后不同時間點的轉錄組分析，已鑒定出 30 余個新的 EBV 裂解期調控基因，為理解病毒潛伏 - 裂解轉換機制提供關鍵數據。
病毒顆粒制備：作為實驗室 EBV 標準來源，其分泌的病毒顆粒可用于感染人 B 淋巴細胞，建立 EBV 轉化的永生化細胞模型（轉化效率約 10??-10?3），用于研究 EBV 與淋巴瘤、鼻咽癌發生的關聯。
干擾素生產與抗病毒研究
天然干擾素制備：B95-8 在 EBV 刺激下可高表達 Ⅰ 型干擾素（IFN-α/β），經誘導后干擾素活性單位可達 10? IU/mL，是早期人用干擾素制劑的重要生產來源。其分泌的干擾素對 EBV、皰疹病毒等具有廣譜抑制作用，為天然抗病du藥物研發提供參考。
抗病du藥物篩選：基于其 EBV 復制特性，可構建藥物篩選模型。例如，通過檢測阿xi洛韋對 EBV DNA 聚合酶的抑制效果，測定藥物 EC??=2.5μM，與臨床療效相關性達 0.86，為抗 EBV 藥物評估提供可靠平臺。
疫苗研發與診斷試劑生產
EBV 疫苗候選抗原制備：B95-8 可高效表達 EBV 糖蛋白 gp350（病毒主要包膜蛋白），重組 gp350 純度可達 95% 以上，已用于 EBV 疫苗的臨床前研究，動物實驗顯示其可誘導中和抗體效價達 1:10000 以上。
診斷抗原制備：其表達的 EBV VCA、EA 可作為診斷抗原，用于傳染性單核細胞增多癥及 EBV 相關腫瘤的血清學檢測（如 ELISA 試劑盒），敏感性達 90%，特異性＞95%。
基礎培養方案
培養基：RPMI 1640 培養基添加 10% 胎牛血清，pH 維持在 7.2-7.4，可加入 2mM L - 谷an酰胺增強細胞活力。
傳代流程：取對數生長期細胞懸液，1000rpm 離心 5 分鐘，棄上清后用新鮮培養基重懸，按 1:3 比例接種至新培養瓶，避免細胞密度過高導致凋亡（存活率＜70%）。
凍存保護：取密度 1×10? cells/mL 的細胞懸液，加入等量含 20% DMSO 的wan全培養基（終濃度 10% DMSO），分裝后經程序降溫盒 - 80℃過夜，轉移至液氮長期保存。
EBV 誘導與收集
裂解期誘導：向對數期細胞中加入 3mM 丁酸鈉，37℃培養 48 小時后更換含 0.1μg/mL 巴佛洛霉素 A1 的培養基，繼續培養 24 小時，EBV 分泌量可提升 5-10 倍。
病毒收集：收集誘導后 72 小時的細胞上清，3000rpm 離心 30 分鐘去除細胞碎片，0.45μm 濾膜過濾后，-80℃分裝保存，使用前需通過噬斑實驗測定滴度。
優勢：
EBV 分泌穩定：是目前唯yi能持續釋放高滴度傳染性 EBV 的細胞系，為 EBV 研究提供標準化病毒來源。
功能多樣性：既可用于病毒學基礎研究，又能生產干擾素與診斷抗原，應用場景廣泛。
培養簡便：懸浮生長無需貼壁支持，適合大規模懸浮培養，便于工業化生產。
局限性：
物種差異：作為絨猴細胞，其 EBV 復制調控機制與人類細胞存在差異，部分研究結果需在人源細胞中驗證。
病毒安全性：分泌的 EBV 具有傳染性，操作需在生物安全二級實驗室進行，避免實驗室感染風險。
誘導效率波動：EBV 裂解期誘導效率受細胞代次影響（傳代＞50 次時下降約 40%），需定期篩選高分泌亞克隆。
B95-8 細胞系的建立為 EBV 研究提供了里程碑式工具，其持續分泌 EBV 的特性推動了 EBV 轉化機制、潛伏感染等基礎研究的突破，同時支撐了干擾素藥物與 EBV 診斷試劑的早期開發。當前，該細胞系仍廣泛應用于 EBV 疫苗研發、抗病di藥物篩選等領域，并通過基因編輯技術（如 CRISPR-Cas9 敲除 LMP1）構建突變體模型，深入解析 EBV 致癌機制。未來，結合類器官技術與 B95-8 來源的 EBV，有望建立更接近體內環境的 EBV 感染模型，為 EBV 相關疾病的防治提供新的研究思路與技術支撐。
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