3T6-Swiss albino小鼠胚胎成纖維細胞系
3T6-Swiss albino小鼠胚胎成纖維細胞系源自 Swiss albino 小鼠胚胎組織,因嚴格遵循 “3T3 培養(yǎng)原則"(每 3 天傳代一次,每次接種 3×10?細胞)而得名,是細胞生物學與病毒學研究的經典模型。
該細胞系具有典型的成纖維細胞形態(tài)與生長特征。顯微鏡下,細胞呈長梭形或不規(guī)則星形,貼壁生長時排列成平行束狀或漩渦狀,胞質豐富,含細顆粒狀物質,細胞核呈橢圓形,核仁清晰可見。與其他成纖維細胞系相比,其形態(tài)更均一,傳代過程中較少出現(xiàn)形態(tài)變異,第 5-20 代細胞能穩(wěn)定維持成纖維細胞表型,高表達波形蛋白(Vimentin),不表達角蛋白(Cytokeratin),明確其間質細胞屬性。
體外培養(yǎng)時,3T6-Swiss albino 細胞展現(xiàn)出嚴格的生長調控特性。最適培養(yǎng)條件為含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)基,在 37℃、5% CO?環(huán)境下,傳代周期約 48 小時,細胞密度達到 1×10?個 /cm2 時會因接觸抑制停止增殖,這一特性使其成為研究細胞周期調控的理想模型。其對血清濃度變化敏感,血清濃度降至 2% 時,G0/G1 期細胞比例從 50% 升至 80%,而恢復血清供應后 4 小時即可重新進入 S 期,這種同步化生長能力便于分析細胞周期特定階段的分子事件。此外,該細胞系凍存復蘇效率高,采用含 10% 二甲基亞砜的凍存液保存后,復蘇存活率超過 90%,能長期穩(wěn)定傳代。
作為病毒復制的優(yōu)良宿主,3T6-Swiss albino 細胞對多種病毒具有高度敏感性。研究證實,其可支持痘苗病毒、水皰性口炎病毒(VSV)及小鼠白血病病毒的高效復制,病毒滴度可達 10? PFU/mL 以上。這種敏感性源于細胞表面豐富的病毒受體,如 VSV 可通過結合細胞表面的低密度脂蛋白受體(LDLR)進入細胞。在病毒增殖動力學研究中,感染后 24 小時病毒滴度達到峰值,同時伴隨細胞病變效應(CPE),表現(xiàn)為細胞變圓、脫落,這一特性使其成為病毒滴度測定與抗病du藥物篩選的標準工具。
在細胞轉化研究中,3T6-Swiss albino 細胞的應用具有里程碑意義。正常細胞在體外培養(yǎng)時具有 “Hayflick 極限",而經致癌物質(如甲基膽蒽)或病毒(如 SV40 病毒)處理后,該細胞可發(fā)生惡性轉化,表現(xiàn)為接觸抑制消失、無限增殖及裸鼠致瘤性。轉化后的細胞在軟瓊脂培養(yǎng)基中能形成明顯集落,集落形成率與轉化程度正相關。通過對比正常與轉化細胞的基因表達譜,發(fā)現(xiàn)轉化細胞中 c-Myc 和 Ras 癌基因表達上調,p53 抑癌基因發(fā)生突變,為解析細胞癌變的分子機制提供了直接證據(jù)。
該細胞系在細胞生物學基礎研究中也不ke或缺。其常用于探究細胞外基質(ECM)的合成與重塑機制,能持續(xù)分泌 Ⅰ 型膠原蛋白、纖連蛋白(Fibronectin)和層粘連蛋白(Laminin),形成完整的 ECM 網(wǎng)絡。研究顯示, TGF-β 處理可使 Ⅰ 型膠原蛋白合成量增加 2 倍,這種調控依賴于 Smad3 信號通路的激活。此外,3T6-Swiss albino 細胞可用于研究細胞遷移機制,在劃痕實驗中,細胞以 “群遷移" 方式閉合傷口,遷移速率受血小板衍生生長因子(PDGF)調控,PDGF-BB 處理后遷移距離增加 40%。
在生物制藥領域,該細胞系是疫苗生產的重要基質。因其能高效表達重組蛋白,常被用于制備病毒樣顆粒(VLPs)疫苗,如通過轉染乙型肝炎病毒表面抗原基因,可分泌具有免疫原性的 VLPs,經純化后作為候選疫苗。同時,其對細胞毒性藥物的敏感性使其可用于藥物安全性評價,通過檢測藥物處理后的細胞活力與乳酸脫氫酶釋放量,篩選低毒性的候選化合物。
隨著基因編輯技術的發(fā)展,CRISPR/Cas9 修飾的 3T6-Swiss albino 細胞模型可精準模擬特定基因功能缺失的表型。例如,敲除 p21 基因后,細胞接觸抑制現(xiàn)象減弱,G1 期阻滯解除,證實其在細胞周期檢查點中的作用。這種基因工程化細胞系為研究基因功能與疾病機制提供了更精準的工具,進一步拓展了其在生命科學研究中的應用范圍。
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