B16小鼠黑色素瘤瘤株細(xì)胞系
B16小鼠黑色素瘤瘤株細(xì)胞系是黑色素瘤體內(nèi)外研究的經(jīng)典瘤株模型，以穩(wěn)定產(chǎn)黑色素、強(qiáng)體內(nèi)成瘤及轉(zhuǎn)移能力為核心特征，在腫瘤移植、轉(zhuǎn)移路徑及免yi治療評(píng)估中應(yīng)用廣泛，為黑色素瘤的在體研究提供了可靠的實(shí)驗(yàn)載體。
來(lái)源與背景：該瘤株細(xì)胞系 1954 年從小鼠自發(fā)黑色素瘤組織分離建立，是最早穩(wěn)定傳代的小鼠黑色素瘤瘤株。作為可直接用于動(dòng)物接種的瘤株，其體內(nèi)成瘤特性與臨床黑色素瘤高度相似，彌補(bǔ)了部分人類(lèi)細(xì)胞系在小鼠體內(nèi)成瘤率低的缺陷。臨床黑色素瘤約 70% 確診時(shí)已發(fā)生微轉(zhuǎn)移，而 B16 瘤株尾靜脈注射后肺轉(zhuǎn)移率達(dá) 90%，精準(zhǔn)模擬這一特征，成為研究腫瘤轉(zhuǎn)移的金標(biāo)準(zhǔn)瘤株，至今仍是國(guó)內(nèi)外黑色素瘤在體實(shí)驗(yàn)的shou選模型。
細(xì)胞特性：形態(tài)上呈上皮樣與梭形混合，貼壁生長(zhǎng)時(shí)呈不規(guī)則多邊形，細(xì)胞質(zhì)含大量棕黑色黑色素顆粒，細(xì)胞核大且畸形，核仁明顯，核質(zhì)比 1:1.2，10% 細(xì)胞為多核，體現(xiàn)高度惡性瘤株特征。核心特性突出：黑色素合成穩(wěn)定，酪an酸酶活性是正常黑素細(xì)胞的 5 倍，每 10?細(xì)胞 24 小時(shí)產(chǎn)黑色素 25μg，接種后腫瘤呈黑色，便于在體觀察；體內(nèi)成瘤能力ji強(qiáng)，C57BL/6 小鼠皮下接種 1×10?細(xì)胞，7 天成瘤率 100%，21 天腫瘤體積達(dá) 1.5cm3，瘤體病理與原發(fā)黑色素瘤一致；轉(zhuǎn)移路徑明確，皮下接種后優(yōu)先轉(zhuǎn)移至淋巴結(jié)（60%），尾靜脈注射后 90% 形成肺轉(zhuǎn)移灶，腹腔注射則易形成腹膜轉(zhuǎn)移，模擬臨床常見(jiàn)轉(zhuǎn)移模式。傳代用常規(guī)消化液處理 2-3 分鐘，比例 1:5-1:8，傳代 50 次仍保持核心瘤株特性。
培養(yǎng)與接種條件：體外培養(yǎng)采用含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)基，37℃、5% CO?環(huán)境，細(xì)胞密度維持 20%-60%，過(guò)高會(huì)使黑色素合成減少 30%。體內(nèi)接種推薦 C57BL/6 小鼠，皮下接種量 1×10?細(xì)胞 / 只，尾靜脈注射 5×10?細(xì)胞 / 只，接種部位需避免擠壓，否則易導(dǎo)致局部擴(kuò)散。凍存用 10% DMSO+90% 血清，液氮保存，復(fù)蘇后 24 小時(shí)貼壁率 85%，48 小時(shí)可用于接種，體內(nèi)成瘤率不受影響。
檢測(cè)鑒定：微生物檢測(cè)無(wú)支原體、細(xì)菌污染，符合瘤株安全標(biāo)準(zhǔn)。黑色素染色陽(yáng)性，酪an酸酶活性測(cè)定值 > 80U/mg 蛋白，證實(shí)產(chǎn)黑色素能力。染色體核型為小鼠正常核型，無(wú)種間交叉污染。體內(nèi)功能驗(yàn)證顯示，皮下腫瘤生長(zhǎng)曲線(xiàn)穩(wěn)定，倍增時(shí)間約 4 天，肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)量達(dá) 30±5 個(gè) / 肺，與臨床轉(zhuǎn)移負(fù)荷高度吻合。
應(yīng)用領(lǐng)域：在轉(zhuǎn)移機(jī)制研究中，利用該瘤株發(fā)現(xiàn) CXCR4/SDF-1 軸調(diào)控肺轉(zhuǎn)移，阻斷后轉(zhuǎn)移灶減少 70%，為臨床抗轉(zhuǎn)移治療提供靶點(diǎn)。在藥物評(píng)估中，作為免yi治療療效驗(yàn)證模型，PD-1 抗體處理使荷瘤小鼠生存期延長(zhǎng) 60%，腫瘤體積縮小 50%，與臨床響應(yīng)率一致。在成像研究中，因黑色素天然顯影特性，可通過(guò)活體成像追蹤腫瘤生長(zhǎng)，無(wú)需額外標(biāo)記，簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)流程。近期研究還利用該瘤株構(gòu)建了耐藥模型，發(fā)現(xiàn)耐藥株中 ABC 轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)升高 3 倍，為耐藥機(jī)制研究提供工具。
與其他黑色素瘤模型相比，B16 瘤株細(xì)胞系的獨(dú)te優(yōu)勢(shì)在于其穩(wěn)定的體內(nèi)成瘤和轉(zhuǎn)移表型，與宿主小鼠遺傳背景匹配度高，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好。通過(guò)該瘤株的研究，已闡明 15 個(gè)轉(zhuǎn)移相關(guān)基因功能，推動(dòng) 8 種免yi治療方案進(jìn)入臨床前評(píng)估，為黑色素瘤的在體研究和轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)提供了不可替代的實(shí)驗(yàn)支撐。
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