Hepa 1-6小鼠肝癌細胞系
Hepa 1-6小鼠肝癌細胞系源自 C57BL/6 小鼠的自發性肝癌，因保留肝癌的核心生物學特征且成瘤性穩定，成為肝癌研究領域的經典模型。其在病理特征、分子機制上與人類肝癌高度相似，為肝癌的發生發展、藥物篩選及相關研究提供了理想工具。
顯微鏡下，Hepa1-6 細胞呈貼壁生長，形態以多邊形和上皮樣為主，宛如鋪展在培養皿上的 “不規則薄片"。細胞直徑約 18-25 微米，比正常肝細胞稍大；胞質豐富，可見散在的脂滴 —— 這是肝癌細胞的典型胞質特征，經油紅 O 染色后呈橘紅色，清晰可辨；細胞核大而圓，位于細胞中央或偏位，核質比約 1:1.2，染色質呈粗顆粒狀，核仁明顯，常為 2-3 個，展現出活躍的增殖能力。細胞倍增時間約 24-36 小時，當融合度達到 70%-80% 時需傳代，傳代時用 EDTA 溶液處理后輕柔吹打使細胞脫落，按 1:4-1:6 比例接種，連續培養 50 代仍能保持穩定的腫瘤表型。
培養 Hepa1-6 細胞需模擬肝臟微環境。基礎培養基選用 DMEM（高糖），其含有的高濃度葡萄糖可滿足肝癌細胞旺盛的代謝需求；添加 10% 熱滅活胎牛血清提供生長因子，其中血清中的胰島素樣生長因子 - 1（IGF-1）對維持細胞的增殖活性至關重要。培養環境需嚴格控制在 37℃、5% CO?的恒溫培養箱中，pH 值穩定在 7.2-7.4，通過培養基中的酚紅指示劑可直觀監測酸堿變化。與其他肝癌細胞系相比，該細胞對培養條件要求較為寬松，但需避免培養基過度酸化，建議每 2-3 天更換一次培養基，以保持細胞活力。
在肝癌發病機制研究中，Hepa1-6 細胞系是解析基因突變與腫瘤進展關系的理想工具。其攜帶 p53 基因突變 —— 這與人類肝癌中常見的功能失活突變高度一致。實驗顯示，該細胞在 DNA 損傷條件下，p53 蛋白無法正常激活，導致細胞周期檢查點失靈，細胞持續增殖。通過導入野生型 p53 基因后，細胞的凋亡率增加 40%，克隆形成能力下降 50%，裸鼠成瘤體積縮小 60%，直接證明 p53 突變在肝癌發生中的驅動作用。此外，該細胞還存在 β- 連環蛋白基因異常，導致其在胞質和細胞核內積累，激活下游靶基因的表達，模擬了人類肝癌中 Wnt 信號通路異常激活的特征。
Hepa1-6 細胞系的代謝特征與人類肝癌高度契合，其表現出顯著的 “瓦堡效應"—— 即使在有氧條件下也優先通過糖酵解供能，乳酸生成量是正常肝細胞的 3-4 倍。這種代謝重編程與己糖激酶 2（HK2）的高表達密切相關，抑制 HK2 活性可使細胞 ATP 生成量下降 50%，增殖速度減緩 60%，為研究肝癌代謝依賴機制及開發代謝靶向藥物提供了jue佳模型。同時，該細胞可合成與分泌甲胎蛋白（AFP），其分泌量與細胞增殖狀態正相關，通過 ELISA 檢測 AFP 水平可快速評估藥物對腫瘤細胞的抑制效果。
在肝炎相關肝癌模型構建中，Hepa1-6 細胞系展現出du特jia值。通過腹腔注射構建肝炎 - 肝癌遞進模型，可見該細胞在慢性炎癥環境中更易形成侵襲性腫瘤，腫瘤組織中炎癥因子（如 TNF-α、IL-6）水平較普通模型升高 2-3 倍，wan美模擬了人類乙肝、丙肝病毒感染誘發肝癌的病理進程。研究發現，炎癥因子可激活細胞內 NF-κB 信號通路，促進 Cyclin D1 表達，加速細胞周期進程，這一機制為解析 “炎癥 - 癌變" 轉化提供了關鍵實驗證據。
在藥物篩選領域，Hepa1-6 細胞系是評估抗肝癌藥物療效的常用模型。其對多種經典藥物的敏感性與人類肝癌組織接近，可通過 MTT 法快速檢測藥物對細胞增殖的抑制率。在篩選新型靶向藥物時，該細胞系能有效反映藥物對特定靶點的作用，例如，使用抗 VEGFR 單克隆抗體處理后，細胞的血管內皮生長因子（VEGF）分泌量下降 70%，細胞遷移能力降低 55%，為評估 VEGFR 抑制劑的療效提供了可靠依據。同時，該細胞系可用于構建荷瘤小鼠模型，通過測量腫瘤體積變化和計算抑瘤率，評估藥物的體內療效。
在腫瘤免疫研究中，Hepa1-6 細胞系的免疫原性特征使其成為免疫相關研究的理想模型。該細胞表達多種腫瘤相關抗原，如甲胎蛋白（AFP）和熱休克蛋白 90（HSP90），可被免疫系統識別。其荷瘤小鼠模型具有完整的免疫系統，能模擬人類肝癌的腫瘤免疫微環境，例如，腫瘤微環境中存在大量巨噬細胞和調節性 T 細胞，可抑制效應 T 細胞的抗腫瘤活性。在免疫檢查點抑制劑研究中，使用抗 CTLA-4 抗體處理荷瘤小鼠，可使腫瘤內 CD8?T 細胞浸潤增加 2 倍以上，腫瘤生長抑制率達 45%，為免疫機制研究提供了良好模型。
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