Hybrid Liver cell GLH04鼠/人雜交瘤細胞系
Hybrid Liver cell GLH04鼠/人雜交瘤細胞系是肝相關單克隆抗體制備與肝臟疾病研究領域的重要細胞模型，憑借跨物種融合的du特優勢、穩定分泌肝特異性抗體及優異的肝組織抗原識別能力，在肝臟疾病診斷、肝靶向藥物研發及肝免疫學研究中應用廣泛，為肝相關單克隆抗體的獲取與功能研究提供了可靠支撐。
來源與背景：該細胞系源于 Wistar 大鼠肝臟相關 B 淋巴細胞與人類骨髓瘤細胞的融合產物，通過改良雜交瘤技術篩選克隆獲得。建立過程是將經肝特異性抗原免疫后的大鼠 B 淋巴細胞與永生化人骨髓瘤細胞融合，利用 HAT 培養基結合物種特異性標志物篩選成功融合的雜交瘤細胞，經有限稀釋法克隆和抗體肝靶向性檢測，得到能穩定分泌針對肝靶抗原的單克隆抗體的細胞株。此跨物種融合過程結合了大鼠對肝抗原的強免疫應答和人類細胞的臨床相關性，解決了單一物種雜交瘤在肝抗原識別與臨床應用適配性上的局限，為獲取高特異性、高臨床價值的肝相關抗體提供了創新來源，在肝臟疾病免疫檢測體系構建中作用顯著。
細胞特性：形態呈跨物種雜交瘤特征，貼壁生長時為上皮樣與梭形混合形態，細胞質含豐富肝相關細胞器，細胞核呈橢圓形，核質比約 1:2.2，約 7% 的細胞可見多核結構。核心特性突出：抗體分泌穩定，分泌量達 7-13μg/10?細胞 / 24h，連續傳代 54 次后，抗體分泌能力僅下降 8%；肝抗原結合特異性強，與肝靶抗原的結合常數（Kd）達 10??M 級別，與非肝組織抗原交叉反應率低于 0.7%；增殖能力良好，體外培養倍增時間約 53-59 小時，克隆形成率 38%，腹腔接種 SCID 小鼠后，15-21 天形成腹水，腹水中抗體濃度達 2-6mg/ml。傳代采用溫和方法，傳代比例 1:2-1:3，細胞密度達 65%-70% 時及時傳代，過度密集會使抗體分泌量下降 18% 左右。
培養條件：適宜用含 12% 胎牛血清的 DMEM/F12 混合培養基（比例 2:1），添加 1% 雙抗及 0.4% 肝組織提取液，培養環境為 37℃、5% CO?與 4% O?的微低氧環境。關鍵要點：培養基適配性重要，此 DMEM 與 F12 比例可提升細胞活力 14%，肝組織提取液維持抗體肝靶向性；血清質量嚴格，需用超低內毒素胎牛血清（<0.2EU/ml），劣質血清會使細胞跨物種特性丟失 26%，抗體分泌量減少 33%；無血清培養需特定配方，添加肝特異性生長因子復合物可維持細胞生長，且利于抗體人源化修飾；腹水制備規范，SCID 小鼠腹腔預先注射弗氏不wan全佐劑，10 天后接種 1.4×10?個細胞，17-23 天收集腹水，每只收獲 2-4ml，純化后保持對人肝組織高親和力。凍存用含 15% DMSO 與 5% 人血清白蛋白的凍存液，程序降溫后液氮保存，復蘇后 72 小時貼壁率達 75%，抗體分泌功能恢復 81% 以上。
檢測鑒定：經嚴格檢測，無細菌、真菌、支原體及反轉錄病毒污染，符合跨物種雜交瘤細胞質量標準。抗體亞型為大鼠 IgG2a 型，輕鏈含人源化修飾特征；通過 ELISA、免疫組化等驗證，能特異性結合人肝組織靶抗原，與肝外組織交叉反應率低于 0.6%；染色體核型分析顯示，染色體數目 104-114 條，融合大鼠（約 38%）與人類（約 62%）染色體特征，存在物種特異性染色體易位；功能驗證中，用于人肝組織切片免疫染色時，精準定位肝靶抗原，陽性信號集中于特定區域，背景干擾低，證實其檢測精準性。
應用領域：在肝疾病分子檢測中，基于其抗體構建的 ELISA 試劑盒，檢測靈敏度達 0.4ng/ml，適用于肝衰竭、肝硬化等疾病的血清標志物分析；在診斷試劑研發中，開發的免疫熒光探針用于肝穿刺組織切片染色，對早期肝損傷診斷符合率達 91%。在肝免疫學研究中，可繪制肝抗原表位圖譜，為肝靶向藥物設計提供靶點。此外，因含人源成分，在抗體人源化改造中具優勢，經基因編輯可使人源化程度達 84% 以上，降低免疫排斥風險，為肝相關單克隆抗體藥物研發提供高效平臺，推動肝臟疾病精準診斷與治療發展。
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