BNL.1ME A.7R.1小鼠肝瘤株細胞系
BNL.1ME A.7R.1小鼠肝瘤株細胞系源自 BALB/c 小鼠的誘發性肝細胞癌，是保留肝細胞惡性轉化特征和肝內高轉移潛能的經典肝臟腫瘤模型，在肝細胞癌的肝內侵襲機制、門靜脈轉移規律及肝靶向藥物篩選研究中具有重要價值，為解析這種原發于肝臟的惡性腫瘤的du特生物學行為提供了理想工具。
該細胞系呈現典型的肝細胞癌細胞形態與表型特征。顯微鏡下，細胞呈多邊形，以貼壁生長為主，排列呈不規則條索狀或巢狀，模擬正常肝細胞的排列方式。細胞核呈圓形或橢圓形，核質比高，染色質呈粗顆粒狀，可見 1-2 個明顯核仁，核分裂象每 10 個高倍視野 6-8 個，胞質豐富，呈嗜酸性，部分細胞胞質內可見脂肪空泡和嗜酸性顆粒（類似肝細胞的代謝特征）。電鏡下可見胞質內含有豐富的線粒體和粗面內質網，細胞膜上有微絨毛結構，符合肝細胞的超微結構特點。免疫表型分析顯示，細胞高表達肝細胞特異性標志物甲胎蛋白（AFP）和白蛋白（ALB），流式細胞術檢測陽性率分別達 85% 和 80%，同時表達肝細胞癌相關抗原 Hep Par 1（陽性率 75%），而膽管細胞標志物 CK19 表達陰性，證實其肝細胞來源特性。
體外培養體系中，BNL.1ME A.7R.1 細胞展現出穩定的增殖能力與強肝內侵襲潛能。最適培養條件為含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養基，添加 1% 非必需氨基酸和 10μg/mL 胰島素，在 37℃、5% CO?環境下，傳代周期約 72 小時，對數生長期細胞活力達 90% 以上，倍增時間約 50 小時。其顯著特點是體外可形成類似肝板的細胞排列，相鄰細胞間形成膽小管樣結構，這種特性與其高表達細胞間連接蛋白緊密連接蛋白 - 1（ZO-1）相關（表達量較其他肝癌細胞系高 25%）。Transwell 侵襲實驗顯示，其穿透肝竇內皮細胞單層的能力是其他肝癌細胞系的 1.8 倍，這種肝內定向侵襲性依賴于高表達的基質金屬蛋白酶 - 9（MMP-9），酶活性較其他肝癌細胞高 3 倍，可高效降解肝竇基底膜的 Ⅳ 型膠原。軟瓊脂克隆形成率達 40%，克隆形態呈圓形或不規則形，邊緣清晰，連續傳代 50 次后，AFP 表達及肝內侵襲能力無明顯衰減，凍存復蘇存活率超 85%。
在動物模型中，BNL.1ME A.7R.1 細胞的成瘤與轉移模式ji具特點。將 1×10?個細胞肝內接種 BALB/c 小鼠，7 天形成局部腫瘤，14 天出現門靜脈癌栓（發生率 70%），21 天肝內轉移灶數量達 15-20 個 / 肝臟，模擬人類肝細胞癌的肝內轉移偏好。病理切片顯示原發瘤呈結節狀生長，肝內轉移灶沿門靜脈分支分布，破壞肝小葉結構，免疫組化可見 AFP 陽性細胞在肝內彌漫浸潤。熒光標記追蹤證實，腫瘤細胞通過門靜脈系統播散并定植于肝內，高表達門靜脈內皮細胞黏附分子 CD146，黏附率達 60%，CD146 抗體處理可使肝內轉移率下降 65%。
發病機制研究揭示其te有的分子異常。基因測序顯示，細胞存在 β-catenin 基因第 3 外顯子突變（S45F）和 p53 基因缺失，導致 Wnt/β-catenin 通路持續激活，Western blot 檢測顯示核內 β-catenin 表達量較正常肝細胞高 8 倍，下游靶基因 Cyclin D1 和 c-Myc 表達上調 5 倍和 6 倍，使用 Wnt 通路抑制劑處理后，細胞增殖率下降 60%，凋亡率上升 40%，證實該通路在其惡性增殖中的核心作用。此外，細胞中 PI3K/Akt 信號通路異常激活，磷酸化 Akt（p-Akt）水平較正常肝細胞高 5 倍，可促進血管內皮生長因子（VEGF）的分泌，VEGF 是誘導肝內血管生成的關鍵因子，該細胞分泌的 VEGF 量是正常肝細胞的 4 倍，抗 VEGF 抗體處理可使肝內微血管密度減少 55%。
轉移機制方面，BNL.1ME A.7R.1 細胞的肝內轉移涉及多重調控。除 CD146 介導的黏附外，細胞高表達趨化因子受體 CXCR4，可響應肝組織高濃度的 CXCL12，遷移能力是 CXCR4 陰性細胞的 2.3 倍，CXCR4 拮抗劑處理可使肝內轉移灶數量減少 50%。基因芯片分析顯示，轉移灶細胞中與肝竇定植相關的基因 ITGB1（整合素 β1）表達上調，該分子可與肝竇基質中的層粘連蛋白結合，促進腫瘤細胞在肝內的存活與增殖，ITGB1 抗體處理可使轉移灶體積縮小 60%。
在藥物篩選應用中，該細胞系是評估肝細胞癌靶向藥物的有效模型。基于其 β-catenin 突變特性，對 Wnt 通路抑制劑敏感，半數抑制濃度（IC50）約 0.6μM，藥物處理后細胞 G1 期比例增加 45%，凋亡率上升 35%。體內實驗顯示，Wnt 通路抑制劑口服可使 BALB/c 小鼠肝內腫瘤體積縮小 70%，肝內轉移率從 70% 降至 25%，療效顯著。其肝靶向特性使其成為肝靶向藥物的理想模型，某新型肝靶向納米載藥系統搭載藥物后，對該細胞的殺傷率達 80%，較游離藥物提高 40%，且在肝內腫瘤組織的富集量增加 5 倍。
在腫瘤微環境研究中，BNL.1ME A.7R.1 細胞與肝星狀細胞的相互作用為解析轉移機制提供了線索。共培養實驗顯示，肝星狀細胞分泌的轉化生長因子 -β（TGF-β）可激活腫瘤細胞的 Smad 通路，使 MMP-2 表達上調 3 倍，侵襲能力增強 50%，TGF-β 中和抗體可阻斷這種促進作用。在缺氧微環境（1% O?）中，細胞 HIF-1α 表達上調，誘導葡萄糖轉運蛋白 GLUT3 表達，使細胞在低氧環境下的存活率達 90%，HIF-1α 抑制劑處理可降低其缺氧適應能力。
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