Ca763小鼠乳腺癌瘤株細胞系
Ca763小鼠乳腺癌瘤株細胞系源自 615 近交系小鼠的自發(fā)性乳腺癌組織，是具有高成瘤速度和多器官轉(zhuǎn)移特性的惡性腫瘤模型，尤其傾向于肺和骨組織轉(zhuǎn)移，在乳腺癌血行播散機制、器官特異性轉(zhuǎn)移調(diào)控及綜he治療策略研究中具有重要價值，為解析乳腺癌跨器官轉(zhuǎn)移的分子異質(zhì)性提供了du特工具。
該細胞系呈現(xiàn)典型的高度惡性上皮細胞形態(tài)與表型特征。顯微鏡下，細胞呈長梭形或不規(guī)則形，貼壁生長為主，部分細胞呈半懸浮狀態(tài)，排列松散無極性，細胞大小差異顯著（直徑 10-25μm），核質(zhì)比ji高，細胞核畸形明顯，可見多核、分葉核及巨核現(xiàn)象，染色質(zhì)呈粗顆粒狀凝集，核仁明顯且數(shù)量多（3-4 個），核分裂象活躍（每 10 個高倍視野 12-15 個），胞質(zhì)少而嗜堿性，可見大量絲狀偽足，電鏡下胞質(zhì)內(nèi)含有豐富的微絲束，細胞間連接極少，體現(xiàn)出強侵襲表型。免疫表型分析顯示，細胞高表達乳腺癌標志物細胞角蛋白 19（CK19）和上皮細胞黏附分子（EpCAM），流式細胞術(shù)檢測陽性率分別達 90% 和 85%，同時特異性表達肺轉(zhuǎn)移相關(guān)分子 CD44v6 和骨轉(zhuǎn)移相關(guān)分子 RANKL，其中 RANKL 在細胞表面的表達量較 Ca761 細胞高 4 倍，為其多器官轉(zhuǎn)移特性提供分子基礎(chǔ)。
體外培養(yǎng)體系中，Ca763 細胞展現(xiàn)出快速增殖能力與強轉(zhuǎn)移潛能。最適培養(yǎng)條件為含 10% 胎牛血清的 RPMI 1640 培養(yǎng)基，在 37℃、5% CO?環(huán)境下，傳代周期約 48 小時，對數(shù)生長期細胞活力達 95% 以上，倍增時間約 28 小時，成瘤速度顯著快于 Ca761 細胞。其顯著特點是體外侵襲與遷移能力ji強，Transwell 侵襲實驗中 24 小時穿透基質(zhì)膠的細胞數(shù)是 Ca761 細胞的 1.8 倍，劃痕愈合實驗 12 小時愈合率達 90%，這種高效運動能力與其高表達 MMP-2 和 MMP-9 相關(guān)，酶譜分析顯示其 MMP 活性較 Ca759 細胞高 2.3 倍。軟瓊脂克隆形成率達 40%，克隆形態(tài)不規(guī)則，邊緣呈放射狀突起，提示其高度惡性的克隆形成能力。凍存復(fù)蘇性能優(yōu)異，液氮凍存后復(fù)蘇存活率超 90%，連續(xù)傳代 50 次后，多器官轉(zhuǎn)移相關(guān)分子表達及侵襲能力無明顯衰減，保證實驗的穩(wěn)定性與可重復(fù)性。
Ca763 細胞的核心價值體現(xiàn)在其對多器官轉(zhuǎn)移過程的精準模擬。在動物模型中，將 1×10?個細胞接種于 615 小鼠乳腺脂肪墊，10 天即可形成可觸及的原發(fā)瘤，21 天肺轉(zhuǎn)移率達 80%（表現(xiàn)為雙肺彌漫性小結(jié)節(jié)），28 天骨轉(zhuǎn)移率達 65%（主要累及股骨和脛骨），轉(zhuǎn)移灶病理顯示腫瘤細胞保留 CK19 表達，肺轉(zhuǎn)移灶可見肺泡間隙浸潤，骨轉(zhuǎn)移灶則伴隨骨質(zhì)破壞和破骨細胞聚集。通過熒光標記追蹤發(fā)現(xiàn)，腫瘤細胞經(jīng)血管播散后，在肺組織通過 CD44v6 與肺泡上皮細胞黏附定植，在骨組織通過 RANKL 與破骨細胞相互作用促進溶骨環(huán)境形成，這種 "血管侵襲 - 器官定植 - 微環(huán)境改造" 的轉(zhuǎn)移模式，與人類乳腺癌多器官轉(zhuǎn)移的臨床特征高度一致。
在肺轉(zhuǎn)移機制研究中，該細胞系揭示了器官特異性黏附的分子機制。細胞高表達 CD44v6，可與肺組織特異性表達的透明質(zhì)酸結(jié)合，流式細胞術(shù)檢測顯示其與肺微血管內(nèi)皮細胞的黏附率達 50%，是與腎內(nèi)皮細胞黏附率的 3 倍，沉默 CD44v6 后，肺轉(zhuǎn)移率降至 30%，同時細胞對透明質(zhì)酸的結(jié)合能力下降 70%。基因芯片分析顯示，肺轉(zhuǎn)移灶細胞中 CXCR4 表達上調(diào)，與肺組織高表達的 CXCL12 形成趨化軸，促進腫瘤細胞在肺內(nèi)增殖，CXCR4 拮抗劑處理可使肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)量減少 60%。
在骨轉(zhuǎn)移機制研究中，Ca763 細胞通過 RANKL-RANK 通路調(diào)控骨微環(huán)境。細胞分泌的 RANKL 可激活破骨細胞的 NF-κB 通路，促進骨吸收，骨片共培養(yǎng)實驗顯示其可使破骨細胞活性增加 2.5 倍，骨吸收陷窩面積擴大 3 倍，而 RANKL 抗體處理可wan全阻斷這種作用。此外，骨基質(zhì)釋放的 TGF-β 可反過來刺激腫瘤細胞分泌更多 RANKL，形成 "腫瘤細胞 - 破骨細胞" 惡性循環(huán)，TGF-β 受體抑制劑處理可使骨轉(zhuǎn)移率下降 45%，證實該環(huán)路在骨轉(zhuǎn)移中的核心作用。
在腫瘤微環(huán)境研究中，該細胞系與不同器官基質(zhì)細胞的相互作用為解析轉(zhuǎn)移微環(huán)境提供了線索。與肺成纖維細胞共培養(yǎng)時，可誘導(dǎo)其分泌 IL-8，促進腫瘤細胞增殖，使克隆形成率提升 40%；與骨髓間充質(zhì)干細胞共培養(yǎng)時，可上調(diào)腫瘤細胞的 survivin 表達，凋亡率下降 50%。在缺氧條件下，細胞 HIF-1α 表達顯著上調(diào)，誘導(dǎo)血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）分泌增加，促進血管生成，條件培養(yǎng)基可使血管內(nèi)皮細胞管腔形成數(shù)增加 3 倍，為血行轉(zhuǎn)移提供通道。
在藥物篩選應(yīng)用中，Ca763 細胞是評估多器官抗轉(zhuǎn)移藥物的理想模型。體外實驗顯示，細胞對紫shan醇的 IC50 為 0.8μM，聯(lián)合使用 RANKL 抗體后，骨轉(zhuǎn)移相關(guān)基因表達下降 55%；體內(nèi)實驗中，紫shan醇與 CXCR4 拮抗劑聯(lián)用可使肺轉(zhuǎn)移率從 80% 降至 35%，與 RANKL 抗體聯(lián)用可使骨轉(zhuǎn)移率從 65% 降至 25%，證實聯(lián)合靶向治療對多器官轉(zhuǎn)移的抑制作用。某天然藥物提取物處理后，細胞 MMP 活性下降 60%，肺和骨轉(zhuǎn)移灶數(shù)量分別減少 50% 和 45%，顯示出廣譜抗轉(zhuǎn)移潛力。
在激素相關(guān)性研究中，Ca763 細胞表現(xiàn)為雌激素受體（ER）和孕激素受體（PR）雙陰性，屬于三陰性乳腺癌模型，不受激素調(diào)控影響，細胞增殖和轉(zhuǎn)移能力主要依賴 EGFR 和 HER2 信號通路，HER2 抗體處理可使細胞增殖率下降 40%，轉(zhuǎn)移能力下降 50%，為三陰性乳腺癌的靶向治療研究提供了實驗基礎(chǔ)。
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