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一種簡單的微環DNA制備與純化方法
宮頸癌（CC）是流行的癌癥之一，由人乳頭瘤病毒（HPV），也就是高危基因型HPV-16和HPV-18引起。持續感染后，HPV16/18編碼E6和E7腫瘤蛋白，分別負責抑制和降解p53和pRB腫瘤抑制蛋白。
過去幾年人類一直在探索基因療法用于治療此類不治之癥。Minicircular DNA（mcDNA）由于沒有原核序列，能最大程度的減少質粒轉染后原核元件對轉染效果和基因組的影響，因此被認為是一種很有前途的載體。然而，其實現的生物技術過程涉及很多步驟，這對制藥行業來說就會比較昂貴。
為了簡化步驟，使mcDNA的制備方法更加簡單可行，貝拉大學健康科學研究中心、快速和可持續產品開發中心和賽多利斯公司聯合開發了一種新的制備方法，該方法使用Sartoclear Dynamics® Lab（硅藻土與負壓濾器組合套裝）直接過濾并去除所有細胞碎片和沉淀的雜質，并結合使用膜層析柱Sartobind Q75 進行純化作為第二步以去除 RNA。
結果
1 用Sartoclear Dynamics® Lab處理粗裂解液的結果比較
這種方法僅需的一個過濾步驟就可快速獲得澄清的裂解物，而不是像傳統方法那樣使用有機溶劑和高鹽并進行三個離心的繁瑣過程。
2 使用Sartobind® Q75膜（季銨配體）進行純化（季銨鹽配體）
用10mM Tris，0.1M EDTA，pH8.0（基礎緩沖液）進行平衡；加載 30 mL用DE處理的裂解液。
大多數RNA雜質在上樣步驟中被直接去除，通過增加NaCl離子強度，最終獲得了分離的DNA。
結論
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使用Sartoclear Dynamics® Lab用硅藻土和過濾處理裂解物，與傳統方法相比，可以節省大量時間、資源和環境影響
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在對平衡和洗脫條件進行一些初步研究后，Sartobind Q75層析膜可以成功去除RNA雜質并分離純度高于90%的DNA
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可繼續進行一些研究以獲得分離的mcDNA載體并獲得最大產量
-本文摘自-
New Combined Approach to Simplify the Minicircular DNA Lysate and Directly Apply in Ion Exchange Membrane Chromatography
Mater. Proc. 2022, 8(1), 41; https://doi.org/10.3390/materproc2022008041
Published: 24 May 2022