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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 12×2 T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 12404ES | 應用領域 | 醫療衛生,化工,生物產業 |
產品介紹
產品信息
產品名稱
產品編號
規格
價格/元
*/元
Hieff NGS® Stubby UDI Primer Kit for Illumina® (12 Index)文庫構建專用接頭試劑盒是
12404ES01
12×2 T
515.00
489.00
Hieff NGS® Stubby UDI Primer Kit for Illumina® (96 Index)文庫構建專用接頭試劑盒是
12405ES01
96×2 T
4135.00
3928.00
Hieff NGS® Stubby UDI Primer Kit for Illumina® (192 Index)文庫構建專用接頭試劑盒是
12406ES01
192×1 T
8160.00
7743.84
Hieff NGS® Stubby UDI Primer Kit for Illumina® (384 Index)文庫構建專用接頭試劑盒是
12407ES01
384×1 T
16320.00
15487.68
產品描述
文庫構建專用接頭試劑盒是Hieff NGS® Stubby UDI Primer Kit for Illumina®是Illumina高通量測序平臺文庫構建專用接頭試劑盒，包含二代測序建庫中使用的PE adapter以及12/96/192/384種UDI Primer。該試劑盒提供的UDI Primer為I5、I7 Primer預混液，配合DNA Library Prep Kit for Illumina®使用，可構建多達384種雙端Index標記的文庫。試劑盒中提供的所有試劑都經過嚴格的質量控制和功能驗證，上保證了文庫構建的穩定性和重復性。
產品組分
編號
名稱
規格
12404ES01
PE Adapter
84 μL
UDI Primer 0001-0012
10 μL each
12405ES01
PE Adapter
2×336 μL
UDI Primer 0001-0096
10 μL each
12406ES01
PE Adapter
2×336 μL
UDI Primer 0001-0192
5 μL each
12407ES01
PE Adapter
4×336 μL
UDI Primer 0001-0384
5 μL each
運輸與保存方法
冰袋運輸。所有組分-20°C保存，有效期1年。
注意事項
1）本試劑盒中DNA Adapter的濃度為15 μM，單個文庫構建的接頭使用量根據所用試劑盒進行調整。
2）本試劑盒提供的PE Adapter為通用型短接頭，需要通過PCR擴增獲得完整的文庫。UDI Primer提供Barcode序列標簽，用于高通量測序時區分樣品。
3）本試劑盒有四種規格，分別提供12/96/192/384種UDI Primer，可以構建多達384種雙端Index標記文庫。
4）切勿加熱接頭，應在室溫讓其緩慢溶解，實驗室溫度最好設置為20-25°C。接頭避免反復凍融，建議分裝保存，可短暫存放于4°C。
5）使用Hieff NGS® Stubby UDI Primer Kit for Illumina®試劑盒構建的DNA文庫結構如下：
6）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
7）本產品僅作科研用途！
使用方法
本試劑盒使用方法按照 Hieff NGS ® MaxUp II DNA Library Prep Kit for Illumina® 試劑盒操作說明進行。
接頭連接 (Adapter Ligation)
在末端修復產物兩端連接特定的Illumina®接頭，即Hieff NGS® MaxUp II DNA Library Prep Kit for Illumina®操作步驟3.2。
1. 根據Input DNA量按照下表1選擇合適的Adapter用量；
表1 不同Input DNA推薦的Adapter使用濃度
Input DNA
Adapter : Input DNA摩爾比
推薦Adapter(15 μM)使用量
400 ng
30:1
3.5 μL
300 ng
40:1
3.5 μL
200 ng
60:1
3.5 μL
100 ng
100:1
3.0 μL
50 ng
100:1
1.5 μL
【注】：Input DNA 摩爾數 (pmol)≈Input DNA質量(ng)/[0.66×Input DNA平均長度 (bp)]
2. 將表2中的各種試劑解凍后顛倒混勻，置于冰上備用；
3. 配制表2所示反應體系；
表2 Adapter Ligation反應體系
名稱
體積 (μL)
dA-tailed DNA
60
Ligation Enhancer
30*
Quick T4 DNA Ligase
5
PE Adapter
x**
ddH2O
5-x
【注】：*Ligation Enhancer比較粘稠，請上下顛倒、振蕩，充分混勻并瞬時后離心使用。
**本公司接頭濃度 (Cat#12404；Cat#12405；Cat#12406；Cat#12407)與常規商業化試劑盒一致，皆為15 μmol/L。
4. 使用移液器輕輕吹打或振蕩混勻，并短暫離心將反應液收集至管底；
5. 將PCR管置于PCR儀中，設置表3所示反應程序，進行接頭連接反應：
表3 Adapter Ligation反應程序
溫度
時間
熱蓋
Off
20°C
15 min
4°C
Hold
【注】：當Input DNA量較低，實驗效果不理想時，可嘗試將連接時間延長一倍。
連接產物磁珠純化 (Post Ligation Clean Up)
該步驟使用磁珠對連接產物進行純化或分選。純化可除去未連接的Adapter或Adapter Dimer等無效產物，分選可篩選特定長度DNA片段以符合測序需要，詳細操作步驟參照Hieff NGS® MaxUp II DNA Library Prep Kit for Illumina®建庫試劑盒說明書。
文庫擴增 (Library Amplification)
該步驟將對純化或長度分選后的接頭連接產物進行PCR擴增富集，使用本試劑盒接頭時，該步驟為必做步驟；
1. 將表4中試劑解凍后顛倒混勻，置于冰上備用；
2. 于無菌PCR管中配制表4所示反應體系；
表4 PCR擴增反應體系
名稱
體積 (μL)
2× Super Canace® II High-Fidelity Mix
25
UDI Primer
5
Adapter Ligated DNA
20
【注】：文庫擴增引物來自Yeasen接頭引物試劑盒 (Cat#12404；Cat#12405；Cat#12406；Cat#12407)。
3. 使用移液器輕輕吹打或振蕩混勻，并短暫離心將反應液收集至管底；
4. 將PCR管置于PCR儀中，設置表5所示反應程序，進行PCR擴增：
表5 PCR擴增反應程序
溫度
時間
循環數
98°C
1 min
1
98°C
10 sec根據實驗需要調整
60°C
30 sec
72°C
30 sec
72°C
5 min
1
4°C
Hold
-
HB210809
