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翌圣生物科技（上海）股份有限公司
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產品簡介
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 1ML |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 13283ES03 | 應用領域 | 生物產業 |
產品介紹
HB191218
2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix
2×高GC多重PCR預混液
產品信息
產品名稱 | 產品編號 | 規格 |
2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix 2×高GC多重PCR預混液 | 13283ES03 | 1 mL |
13283ES08 | 5×1 mL | |
13283ES50 | 50 mL | |
13283ES60 | 250 mL | |
13283ES76 | 500 mL |
產品描述
本產品適用于多重PCR實驗。2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix以熱啟動多重PCR酶制劑與2×擴增緩沖液為組分配置成預混液。本預混液可兼容GC含量在25%-70%左右的多重基因擴增，快速便捷地用于多重PCR反應，具備高均一性、高特異性和高靈敏度的特點。本試劑適用于不同多重PCR需求，可用于凝膠電泳鑒定20對以內不同大小片段的多重產物，也可用于進行數百重及以上擴增子的富集。
運輸與保存方式
冰袋運輸。-20℃儲存，有效期1年。
參考反應體系
組分 | 體積（μL） | 終濃度 |
2×Hieff NGS® HG Multiplex PCR Master Mix | 15 | 1× |
Primer mix | x | 0.1 μM-0.5 μM |
模板DNA | 1 ng-400 ng | - |
無菌超純水 | up to 30 | - |
【注】
1）上表中DNA量和引物濃度均為推薦用量和濃度，可根據具體實驗情況進行調整適濃度。
2）參考建議：每條引物的濃度可在0.1 μM-0.5 μM范圍內進行調整。
3）預混液中已經包含擴增所需要的酶、dNTP、鹽離子等，無需額外添加。
第—輪擴增程序
循環步驟 | 溫度（℃） | 時間 | 循環數 |
預變性 | 95℃ | 3 min | 1 |
變性 | 95℃ |
| 15-45 |
退火延伸 | 60℃ | 4-10 min | |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
【注】 在PCR儀上設置上表中的反應程序進行多重PCR反應（設置熱蓋溫度至105℃左右）。
退火延伸時間：100重PCR推薦4 min；1000重推薦8-10 min需要自己根據引物情況摸索。
PCR產物磁珠純化: 建議在30 μL 反應體系中加27μL磁珠（Cat:12601）進行產物純化。
第二輪擴增程序
循環步驟 | 溫度（℃） | 時間 | 循環數 |
預變性 | 95℃ | 3 min | 1 |
變性 | 95℃ |
| 15-45 |
退火 | 60℃ | 1 min | |
延伸 | 72℃ | 30 sec |
|
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
【注】：退火溫度和時間：推薦使用60℃，也可根據需要，設立溫度梯度去摸索引物退火的適溫度。推薦退火時間設置為1 min，可以在30 s-1 min內調節。退火時間太長可能導致擴增產物在膠上呈彌散狀。
PCR產物磁珠純化
建議在30 μL 反應體系中加27μL磁珠（Cat:12601）進行產物純化。
