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通用型 DNA 損傷彗星銀染檢測試劑盒產品說明書
閱讀：1727 發布時間：2021-9-8| 提 供 商 | 上海哈靈生物科技有限公司 | 資料大小 | 142.9KB |
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主要用途
通用型 DNA 損傷彗星銀染檢測試劑是一種旨在采用組織細胞堿性凝膠電泳，在電場環境下，損傷變性的 DNA 片段遷移形成特定的形態，即 DNA 移動尾巴，來進行體外評價和半定量分析 DNA 損傷程度的 而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于新鮮動物細胞、組織、血液、骨髓 等樣品的 DNA 損傷研究，包括 DNA 鏈斷裂、氧化性堿基損傷、DNA 剪切損傷、DNA 交聯、DNA 修復等， 應用于環境和藥物毒理學、放射學、氧化應急反應等研究。產品嚴格無菌，即到即用，性能穩定，操作簡 便，重復一致。
技術背景
彗星檢測技術（Comet assay），又稱為單細胞凝膠電泳檢測技術（single cell gel electrophoresis assay；SCGE） 或微凝膠電泳檢測技術（microgel electrophoresis assay），是基于變性切離的DNA片段，在電場的影響下， 從細胞中移出的原理，而完整的超螺旋DNA仍然保持在細胞核內。通過凝膠電泳，呈現出分子遷移圖形， 形成彗星拖尾（comet tail）現象，即完整DNA的細胞染色體為“頭"，而松散和斷裂的DNA為“尾"，以此評 價DNA損傷程度。這是分析單一細胞DNA鏈斷裂的敏感方法之一。其技術方法的基本步驟是：第一，細胞 固定包埋在凝膠里；第二，細胞裂解處理；第三，DNA變性處理；第四，電泳遷移；第五，染色和圖像分 析。由此觀察DNA遷移形態，進行體外檢測，成為細胞DNA損傷研究的基本手段。其中電泳條件將決定檢 測的敏感程度。堿性電泳（alkaline electrophoresis）為常規電泳檢測，可以檢測單鏈DNA斷裂、雙鏈DNA 斷裂、大部分無嘌呤核酸位點（apurinic site）和無嘧啶核酸位點（apyrimidic site）、堿不穩定DNA結合物 （alkali-labile DNA adduct）等DNA損傷。
用戶自備 無離子水：用于稀釋電泳緩沖液 磨砂載玻片和蓋玻片：用于放置樣品進行微凝膠電泳的器材 電泳槽：用于微凝膠電泳的裝置 恒溫培養箱或恒溫水槽：用于孵育反應 1.5 毫升離心管：用于樣品操作的容器 90 mm 培養皿：用于樣品處理、染色等的容器 光學顯微鏡：用于觀察細胞彗星現象
注意事項 1． 本產品為 20 次操作 2． 操作時，須戴手套 3． 整個操作，建議在暗光下進行 4． 建議使用新鮮培養的動物細胞、組織、血液等；細胞量為 105細胞/毫升 5． 可以使用 100 微摩爾過氧化氫或 25 微摩爾高錳酸鉀冰上孵育 10 分鐘預處理樣品作為陽性對照 6． 電泳液（Reagent E）： 10 倍濃度為 3 摩爾 NaOH，10 毫摩爾 EDTA，pH 13.5 7． 凈化液（Reagent F）： 70%ETHANOL 8． 操作時小心輕柔，避免膠體脫位 9． 電泳溫度過高，會造成膠體脫位5 10．電泳時，電壓 25 伏為佳，建議控制電泳液量達到要求 11．細胞 DNA 損傷彗星圖像如下（400 倍）