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總抗氧化能力試劑盒說明書
閱讀：1381 發布時間：2022-8-19注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義測定對象中各種抗氧化物質和抗氧化酶等構成總抗氧化水平。在生物學、醫學和藥學研究 中常常檢測血漿、血清、唾液、尿液等各種體液，細胞或組織等裂解液、植物或中草藥抽提液 及各種抗氧化物(antioxidant)溶液的總抗氧化能力。 測定原理
在酸性環境下，物質還原 Fe3+-三吡啶三吖嗪(Fe3+-TPTZ)產生藍色的 Fe2+-TPTZ 的能力反映 了其總抗氧化能力。
自備實驗用品 可見分光光度計、恒溫水浴鍋、低溫離心機、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。
試劑組成和配制 提取液：液體 60mL×1 瓶，使用前預冷。 試劑一：液體 50mL×1 瓶，避光保存。 試劑二：液體 5mL×1 瓶，4℃避光保存。 試劑三：液體 5mL×1 瓶，避光保存。
樣品的制備 (1) 血清、血漿、唾液或尿液樣品 血漿（制備時可以使用肝素或檸檬酸鈉抗凝，不宜使用 EDTA 抗凝）4℃，5000rpm 離心 10min，取上清待測。血清、唾液或尿液樣品直接用于測定，也可以-80℃凍存（不宜超 30 d） 后再測定。
(2) 組織樣品 按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液）進行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 (3) 細胞樣品 按照細胞數量（104個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞 加入 1mL 提取液），冰浴超聲波破碎（功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；10000g， 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
總抗氧化能力計算
1. 定義：樣品的抗氧化能力以達到同樣吸光度變化值（△A）所需的標準液離子濃度表示。 標準曲線為 y=0.6308 x +0.1291，R2=0.9989 2. 計算公式：
(1)按蛋白濃度計算 總抗氧化能力（U/mg prot）=1÷0.6308×（△ A-0.1291）× V 反總÷（V 樣× Cpr） =53.9×（△ A-0.1291）÷ Cpr
(2)按樣品質量計算 總抗氧化能力（U/g）=1÷0.6308×（△ A-0.1291）× V 反總÷（V 樣÷V 樣總×W） =53.9×（△ A-0.1291）÷ W (3)按細胞數量計算 總抗氧化能力（U/104 cell）=1÷0.6308×（△A-0.1291）×V 反總÷V 樣×V 樣總÷細 胞數量（萬個）= 53.9×（△A-0.1291）÷ 細胞數量（萬個） (4)按液體體積計算 總抗氧化能力（U/mL）=1÷0.6308×（△A-0.1291）× V 反總÷V 樣 =53.9×（△A-0.1291）÷ Cpr V 樣總：加入提取液體積，1 mL； V 反總：反應總體積，1.02mL；V 樣：反應中樣品體積， 0.03mL；W：樣品質量，g；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL
注意事項 1. 試劑二對人體有刺激性，請采取適當的防護措施。為了您的安全和健康，請穿實驗服并 戴乳膠手套操
2. 盡量避免使用在酸性條件下呈藍色或接近藍色的試劑，否則對本試劑盒的檢測結果產生 干擾。
3. 樣品中不宜添加 Tween、Triton 和 NP-40 等去垢劑和 DTT、巰基乙醇等影響氧化還原反 應的還原劑。
4. 如果樣品測定出來的吸光值在標準曲線范圍以外，需把樣品適當稀釋或濃縮后再進行測 定。 5. 試劑盒 2-8℃保存。