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滬鼎解說 ELISA試劑盒原理及清洗
閱讀：820 發布時間：2014-9-24 根據上海滬鼎技術部研究呈現，美國TSZ品牌ELISA試劑盒有雙抗夾心法、間接法、競爭法、捕獲包被法、ABS這五種檢測系統，應用定性夾心免疫檢測技術原理是：用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條，這些多肽是中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強的肽段，分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。
將樣品或標準品加入 孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM抗體，這些抗體就會與HEV的多肽抗原結合，并固定在上面，洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP酶結合物，經第二次孵育后，酶結合物就會與*次孵育結合上的HEV IgM抗體相結合，洗板除去未結合的酶結合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育時會發生酶-底物反應，只有那些含有HEV IgM抗體和酶結合物所形成的復合物的孔才會發生顏色變化，加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應，并在波長：450nm處測量O.D.值，按照本HEV IgM抗體elisa試劑盒的測試標準，O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認為是初試陽性。
·ELISA試劑盒的清洗
試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA)。已知濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌，去除未結合的酶結合物，然后加入底物A、B，和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關系。
免疫測定技術的基礎在于抗原抗體之間的特異結合反應，所以任何的診斷試劑離不開的原料，如抗原抗體，酶等。以前用于免疫測定的抗原通常為各種純化抗原，而抗體則為純化抗原免疫動物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術得到的 單克隆抗體，而抗原或抗體的標記物如酶標結合物則通過各種化學合成方法制備。近年來，隨著分子生物學的發展，使用 基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結合物等免疫測定試劑幾成為現實的新一代試劑，各種新型使用的ELISA試劑盒測定方法也不斷出現。