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ELISA檢測試劑盒原理
    應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中待測物質(zhì)水平。用純化的待測物質(zhì)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入待測物質(zhì)，再與HRP標(biāo)記的待測物質(zhì)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測物質(zhì)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中待測物質(zhì)濃度。
    不同廠家的試劑盒的檢測范圍并不相同，一般說來，診斷試劑的檢測范圍以ng/ml計。而常見的科研試劑盒中的樣本中的目標(biāo)蛋白，范圍可隨樣本的類型而變化。所以實驗前應(yīng)通過文獻(xiàn)和預(yù)實驗的方法確定樣本是否在所購試劑盒的范圍內(nèi)，如果不在檢測范圍內(nèi)，分兩種情況對待。
 1. 如果樣本中目標(biāo)蛋白太低，需找相應(yīng)靈敏度更高的試劑盒來檢測或濃縮樣本；
 2. 如果樣本中目標(biāo)蛋白太高，則需要進(jìn)一步稀釋后進(jìn)行檢測。
    
   1971年Engvall和Perlmann發(fā)表了酶聯(lián)免疫吸附劑測定用于IgG定量測定的文章，使得1966年開始用于抗原定位的酶標(biāo)抗體技術(shù)發(fā)展成液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測定方法。
    組織勻漿液的樣本，要制備過程中需要在緩沖液中加入蛋白酶抑制劑，防止蛋白成份被內(nèi)源性蛋白酶降解，造成檢測結(jié)果的值偏低。因組織勻漿液的樣本蛋白種類多，含量豐富，實驗參照血清血漿標(biāo)本的處理方法進(jìn)行，否則就會影響實驗結(jié)果。具體是加入50 ul樣本分析緩沖液后加50 ul標(biāo)本，需稀釋時，請將樣本與樣本分析緩沖液等量加入，不足部分用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液補充至100ul。
    因為目標(biāo)蛋白不同，可能造成降解的蛋白類型可能不一樣，如果實驗前通過文獻(xiàn)確定用哪種蛋白酶抑制劑，有針對性加入，可節(jié)省抑制劑。如果查不到相關(guān)文獻(xiàn)，可采用組合抑制的辦法確保蛋白不易被降解。