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滬鼎生物實驗肺炎衣原體過程，讓我們用elisa法來檢驗
閱讀：1427 發(fā)布時間：2014-3-13 檢驗肺炎衣原體？我們知道elisa實驗是比較常用的，具有屬于自己的優(yōu)點與特點，被常用于免疫學檢驗中。今天我們要帶領大家了解的一個實驗就是相關檢驗肺炎衣原體，下面就來看一看，滬鼎生物實驗肺炎衣原體過程，讓我們用elisa法來檢驗。
我們這個實驗的標本需要取新鮮末梢血或靜脈血。如采血后24h內(nèi)不能進行試驗，分離血清后將其保存于一20℃環(huán)境中。在做檢測實驗的時候，使樣本恢復至室溫。
實驗中所需要用到的試劑：
1、濃縮酶聯(lián)物；
2、標本稀釋液；
3、終止液；
4、陽性對照；
5、弱陽性對照；
6、預包被微孔板；
7、底物A、B；
7、陰性對照。
選用elisa方法，血清加到包被純化的肺炎衣原體抗原的微滴孔中，使之發(fā)生反應，然后去除未結合的抗體，加入結合有HRP的抗人Ig抗體使之與已結合的抗體反應，結合的HRP與發(fā)色底物發(fā)生顏色反應。zui后，終止底物反應，在酶標儀上讀出光密度值。
實驗檢驗過程：
1、配制洗滌液 l瓶濃縮洗滌液加475ml蒸餾水。配好的洗滌液短期內(nèi)可置室溫環(huán)境中，長期可存于2—8℃環(huán)境中。
2、配制酶聯(lián)物 按1：101倍稀釋，即取1u1濃縮酶聯(lián)物加酶聯(lián)物稀釋液1 000ul(根據(jù)檢測標本數(shù)量確定稀釋量)，未用完的丟棄。
3、待試劑盒平衡至室溫后，待測標本按1；51稀釋，即取4tA血清與200u1標本稀釋液混合。
4、將稀釋標本置37℃環(huán)境中20min。
5、各加100ul陽性、弱陽性、陰性對照及已稀釋待測標本上清液于相應孔中，空白對照孔加100u1標本稀釋液，蓋好反應板，置37℃環(huán)境中30min。
6、甩盡板中液體，每孔用200～300ul洗滌液洗5次，每次均需拍干。
7、每孔加酶聯(lián)物100~1，蓋好反應板，置37℃環(huán)境中30min。
8、甩盡板中液體，洗5次，每次拍干。
9、加底物A、B各1滴或各50tzl，混勻，置37℃環(huán)境中15min。
10、取出，加終止液1滴，用酶標儀450nm測其OD值。若肉眼觀察則不加終止液，直接判斷結果。
實驗過后，我們要做一個結果判斷：
1、陰性對照平均OD值須小于0．20。
2、弱陽性對照平均OD值須在0．20—0．65。
3、弱陽性對照與陰性對照的平均OD值之比須≥2。符合以上3個條件時，本試驗結果可信，否則重復實驗。
4、若待測標本孔顯色比弱陽性對照孔深則判為陽性，反之為陰性。但在弱陽性對照值上下10％范圍內(nèi)再測1次，如確實高于弱陽性對照則可判為陽性。
以上就是我們?yōu)槟窒淼膶嶒炄^程啦，上海滬鼎生物在這里為大家說幾個實驗中的注意事項，這個實驗結果須結合臨床表現(xiàn)、病史作出診斷后，方可采取適當臨床處理。還有就是試劑盒雖然含有消除干擾因子的物質，但仍可能有少量標本難以除盡干擾。因此，如某標本多項IgM均為陽性，應考慮RF的干擾。
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