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乳酸脫氫酶基本化學反應及常見測試辦法
閱讀：3085 發布時間：2013-7-29乳酸脫氫酶基本化學反應及常見測試辦法
乳酸脫氫酶是一種糖酵解酶。乳酸脫氫酶存在于機體所有組織細胞的胞質內，其中以腎臟含量較高。乳酸脫氫酶是能催化乳酸脫氫丙酮酸的酶，幾乎存在于所有組織中。同功酶有五種形式，即LDH－1（H4）、LDH-2（H3M）、LDH－3（H2M2）、LDH-4（HM3）及LDH-5（M4），可用電泳方法將其分離。LDH同功酶的分布有明顯的組織特異性，所以可以根據其組織特異性來協用診斷疾病。正常人血清中LDH2，>LDH1。如有心肌酶釋放入血則LDH1>LDH2，利用此指標可以觀察診斷心肌疾病。
英文名稱：LAD；LDH；Lactic dehydrogenase（rabbit muscle）
其他名稱：L-乳酸脫氫酶；乳酸去氫酵素
CAS號：9001-60-9
級別：BR
分子量：約36000
活力：≥300u/mg protein
活力定義：One unit will reduce 1.0 μmole of pyruvate to L-
lactate per min at pH 7.5 at 37℃
濃度：≥5000u/ml
性狀：懸浮液。酶反應：乳酸鹽+輔酶I＝丙酮酸鹽+還原輔酶I+H+ 。等
電點pI 4.6。在25℃,pH 5.0～11.0時穩定；在pH小于5時,120分鐘后沒
有活力（放置同樣時間,在pH 5.0時有100%活力,在pH 6.0時有84%活力）
用途：生化研究。丙酮酸鹽的檢定
保存：2～8℃
乳酸脫氫酶（1actate dehydrogenase，LDH）是輔酶I（NAD）依賴性脫氫酶，能氧化乳酸為丙酮酸，為無氧糖酵解途徑的標志酶。硝基藍四唑鹽法顯示LDH活性的原理與顯示SDH活性的原理基本相同，只是需加用NAD，氫從反應的還原型輔酶I（NADH）傳遞給四唑鹽，將其還原為甲脂。
1）孵育液配制
0．06mol/LPBS 0．25ml
1．0mol/LD，L乳酸鈉 0．1ml
0．4％NAD 0．1ml
0．4％NBT 0．25ml
0．1mol/LKCN 0．1ml
0．5mol/LMgCl： 0．1ml
蒸餾水 10ml
2）操作程序：
①固定：用預冷的2％多聚甲醛（0．1mol/LPBS，pH 7．4配制）灌注固定5分鐘；
②洗滌：用冷PBS灌流沖洗固定液；
③取材：取所需組織，用PBS洗3次；
④切片：冰凍切片或振動切片，裱于涂有黏附劑的載玻片上：
⑤孵育：在上述孵育液中，暗處反應5分鐘，室溫下反應30分鐘；
⑥封片：洗滌、脫水、甘油明膠封固和鏡檢。
3）結果：酶反應陽性部位呈藍色。該酶對固定劑的耐受性較好，采用先固定后孵育，可保存結構防止酶擴散。為了防止定位異常，在底物中加入聚乙烯醇（PVA）或聚乙烯吡咯烷酮（PVP），可使底物黏稠度增加，防止反應產物擴散。
4）對照實驗：除去孵育液中的底物，結果應為陰性。
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