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如何從脂肪組織中提取總蛋白？
閱讀：4914 發布時間：2017-5-18 從培養的細胞和組織中提取總蛋白是實驗室非常常見的實驗步驟，從大多數類型的細胞和組織中提取總蛋白比較容易，但是從脂肪組織中提取高質量和高濃度蛋白質是非常困難的。脂肪組織有白色和棕色脂肪兩種類型，被稱為白色脂肪組織（WAT）和棕色脂肪組織（BAT）。脂肪組織中含有許多脂滴，蛋白質含量小于細胞總數的 2%。低蛋白含量使得從脂肪中分離高濃度蛋白挑戰性。以下是幾種從脂肪組織中提取蛋白的方法：
A.RIPA 緩沖液提取法：
脂肪組織通過含有表面活性劑的緩沖液（例如 RIPA 緩沖液）勻漿，離心后，收集脂肪層下的液體組分為蛋白質，這種方法是相對簡單的，但是蛋白質的產量非常低，因為表面活性劑經常導致蛋白質形成微小顆粒導致蛋白丟失。
B. 有機溶劑萃取 TCA 沉淀法：
有以下三種方法：1）脂肪組織通過蔗糖密度梯度離心，丙酮中加入三氯乙酸（TCA）-20℃ 過夜沉淀蛋白。2）脂肪組織用有機溶劑提取液裂解（CHCl3和甲醇的混合物），也如上用 TCA 沉淀。3）脂肪組織用有機溶劑提取液（TEF 和CHCl3勻漿，通過離心將水相和CHCl3相分離，將其上的水相和交界面去除，并通過離心蒸發干燥。以上三種方法的共同問題是操作繁瑣，產量低。
C. 離心管柱提取法：
這種方法利用了一種新的蛋白質提取技術，脂肪組織通過無表面活性劑的緩沖液勻漿，水油乳狀液通過簡單的冷凍后，離心使其通過特殊的離心管柱（有孔徑，表面性質被處理過的）提取。離心管柱的作用是快速，干凈的從油相中分離出水相蛋白。Invent Biotechnologies Inc 公司利用技術生產的這種脂肪蛋白提取試劑盒可以從脂肪組織中提取全部的總蛋白，產量遠遠高于其他方法。