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細胞培養過程關鍵步驟有哪些/
閱讀：46 發布時間：2025-7-15細胞培養是一種在實驗室環境中維持細胞生長和繁殖的技術，廣泛應用于生物學研究、藥物開發和醫學治療等領域。
細胞培養過程包括以下幾個關鍵步驟：
1. 原代培養：從供體中取出組織，通過機械或酶消化分離成單個細胞或單一型細胞群。這需要在無菌、適當溫度和營養條件下進行，以確保細胞的生存、生長和繁殖。
2. 傳代培養：
1) 當細胞密度達到80%~90%時，移除培養基，用PBS清洗細胞。
2) 加入胰蛋白酶消化細胞，使細胞從培養基中分離。
3) 終止消化后，用含血清的培養基中和胰蛋白酶，然后吹打形成單細胞懸液。
4) 根據需要，將細胞按一定比例接種到新的培養瓶中，通常每平方厘米接種25×10?個細胞。
3. 換液與觀察：
1)定期更換培養基，通常在接種后24小時第1次換液。
2)使用顯微鏡觀察細胞狀態，確保貼壁細胞展開偽足，避免異常信號如顆粒增多、空泡化。
4. 凍存與復蘇：
1) 凍存：準備凍存液（含DMSO和血清），將細胞懸液與凍存液按一定比例混合，裝入凍存管，逐步降溫至液氮中保存。
2) 復蘇：從液氮中快速取出凍存管，立即放入37℃水浴中解凍，加入預熱的含血清培養基，離心后去除上清液，加入新的培養基，放入孵箱中培養。
5. 3D培養（高階技巧）：
使用基質膠（Matrigel）在培養瓶中形成三維結構，促進類器官的形成和生長。
6. 條件培養基制備：
收集高匯合度細胞的上清液，通過超濾濃縮，用于特定實驗條件下的培養。
7. 污染防控：
定期檢查并處理真菌、支原體等污染，使用PCR檢測和相應抗生素處理。
8. 細胞培養的注意事項：
1) 保持無菌環境，使用超凈工作臺進行操作。
2) 正確選擇和配置培養基，考慮細胞類型和實驗需求。
3) 細胞培養過程中要定期檢查細胞狀態，及時調整培養條件。
4) 注意細胞培養的溫度、氣體環境和濕度控制。
9. 細胞培養的標準化操作：
根據細胞類型和實驗目的，制定標準化的操作流程和參數。
10. 細胞培養的應用：
藥物篩選、毒性測試、生物化合物生產等。
通過以上步驟和注意事項，可以確保細胞培養過程的高效和實驗結果的可靠性。