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人ELISA試劑盒步驟方法?

閱讀:1110          發布時間:2020-8-19

人ELISA試劑盒操作步驟:

使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。

根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應孔內。

加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。

甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。

每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。

甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。

每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘。避免光照。

取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。

在450nm波長處測定各孔的OD值。

6號標準品以上的結果為非線性的,根據此標準曲線無法得到jing確的結果。

 試劑盒性能

1. 靈敏度:小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。

2. 特異性:不與其它細胞因子反應。

3. 重復性:板內、板間變異系數均小于10%。

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