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人急性T細胞白血病細胞

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產(chǎn)品型號:

品       牌:其他品牌

廠商性質(zhì):代理商

所  在  地:上海市

更新時間:2025-06-24 07:22:26瀏覽次數(shù):216

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冷凍細胞操作步驟:

1.收集對數(shù)生長期細胞;
2.以25μl臺盼藍溶液稀釋25μl細胞懸液;用血球計數(shù)板計數(shù)并計算細胞存活率(至少應(yīng)該在90%以上);
3.細胞懸液在4℃ 條件下200磄離心10分鐘;
4.將沉淀的細胞重新懸浮在冷凍液中(大約5?06細胞/0.5 ml 冷凍液);
5.將細胞懸液加入到冷凍管中,每管0.5 ml;
6.將冷凍管置于-80℃冰箱中;
7.24小時后,將冷凍管移入液氮罐中;
8.在記錄本或電腦中記錄下每一個冷凍管的位置以確保在以后應(yīng)用時能夠找到每一個冷凍管。

傳代方法:
收到細胞后,取出培養(yǎng)瓶在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況。 (一)如果細胞未長滿,用75%酒精噴灑整 個瓶消毒后放到超菌 臺內(nèi),嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶,吸出培養(yǎng)液,僅留下 10ml培養(yǎng)液在瓶內(nèi)繼 續(xù)培養(yǎng)。
(二)如果細胞已長滿,即可進行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下:
1. 棄去培養(yǎng)液,用PBS(不含鈣,鎂離子)洗1-2次。
2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中, 倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱,然后又 將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30 秒后,在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓分 散,輕敲幾下培養(yǎng) 培養(yǎng)瓶,細胞隨即脫落下來。
3. 加入6-8ml*培養(yǎng)基,吸出,分到新的培養(yǎng)瓶中。1:3~1:6 傳代;2~3天1次。

注意:傳代后一半用我們的培養(yǎng)基,一半用你們的,以免細 胞不適應(yīng)而造成生長不好。
凍存方法:凍存液:基礎(chǔ)培養(yǎng)基 +5%DMSO+20%FBS 
儲存:液氮儲存

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